Cel-gebaseerde Potentie Assays
De Betekenis van mRNA Potentie-Assay
Met de snelle ontwikkeling van mRNA-vaccins en therapieën is een specifieke reeks analysemethoden nodig om de potentie (het definiëren van hun biologische activiteit) te testen, met inbegrip van de vertaal-efficiëntie van mRNA. Deze methoden zijn meestal gebaseerd op celtransfectie en functionele assays van het doel eiwit.
Yaohai Bio-Pharma biedt celgebaseerde potentie-assays aan voor mRNA-drogsubstansen of LNP-producten, inclusief celtransfectie (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 cellen, etc.) en ELISA of Western Blotting (WB) assays.
Reguliere Eisen voor Potentie-Assays
Volgens de WHO-regelgeving, "De sterkte van elke partij van het eindige vaccin moet worden bepaald met behulp van een geschikte kwantitatieve en gevalideerde functionele methode(n). Mogelijke in vitro sterkteassays kunnen cellulaire transfectiesystemen of celvrije assays omvatten." En de USP raadde een "celgebaseerde assay" aan om de sterkte van mRNA te testen, d.w.z. expressie van het doelproduct.
Analytische Methode
|
Analyse
|
Methoden
|
|
Sterkteassays
|
Celgebaseerde transfectie en identificatie van doelproteïne:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 cellen, etc.
|
Proces
Stap 1. Celgebaseerde Transfectie met mRNA of mRNA-LNP
De cellen worden gekweekt en getransfereerd met mRNA of mRNA-LNP. Meer specifiek, mRNA wordt getransfereerd nadat het is gemengd met een transfereerreagens, terwijl mRNA-LNP rechtstreeks in de cellen wordt getransfereerd. Na 24-48 uur, helder het supernatant dat het uitgedrukte eiwit bevat door centrifugatie.
Stap 2. Functionele Assays van het Doelproteïne
Voer ELISA- of WB-tests uit om de functionele binding van de doelproteïnen te beoordelen.
Gevalstudie
Celgebaseerde Potentietests van mRNA-monsters
Yaohai-BioPharma heeft een celgebaseerde potentietestmethode voor mRNA ontwikkeld, met inbegrip van celcultuur, celtransfectie en proteïnfunctionele tests. We hebben eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferase mRNA en spike-proteïne mRNA getransfereerd naar 293T-cellen en het doelproteïne gedetecteerd via fluorescerende, lichtgevende of gekleurde signalen, WB, ELISA.
Celgebaseerde Potentietests van mRNA-producten door Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
