Data pemetaan peptida berbasis Kromatografi Cair-Spektrometri Massa (LC-MS) akan memberikan sejumlah besar informasi tentang struktur primer dan orde tinggi dari protein asli dan rekombinan, termasuk cakupan urutan asam amino, modifikasi pasca-translasi (PTM, misalnya glikosilasi , oksidasi, deamidasi), ikatan disulfida, dll.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan layanan analisis pemetaan peptida untuk protein target Anda dengan LC-MS, untuk mempercepat penelitian Anda tentang struktur protein.
Kami telah terlibat dalam Karakterisasi Struktural Protein dari berbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodi/VHHs/ Antibodi Domain Tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Persyaratan Peraturan untuk Pemetaan Peptida
Pedoman ICHQ6B merekomendasikan, “Fragmentasi selektif produk menjadi peptida diskrit dilakukan dengan menggunakan enzim atau bahan kimia yang sesuai dan fragmen peptida yang dihasilkan dianalisis dengan HPLC atau prosedur analisis lain yang sesuai. Fragmen peptida harus diidentifikasi sejauh mungkin menggunakan teknik seperti analisis komposisi asam amino, pengurutan N-terminal, atau spektrometri massa (MS). Pemetaan peptida bahan aktif atau produk obat (DP) menggunakan metode tervalidasi yang tepat adalah metode yang sering digunakan untuk memastikan struktur produk yang diinginkan untuk pelepasan batch.”
Metode analitis
| Analisis |
metode |
| Pemetaan Peptida |
Pencernaan Protease dan Kromatografi Cair-Spektrometri Massa (LC-MS) |
Prosedur Analitis
1. Reduksi dan Alkilasi
Tujuannya adalah untuk mengurangi jembatan disulfida dan memblokir tiol bebas yang dihasilkan. Pengurangan jembatan disulfida membantu membuka struktur protein yang membuat pencernaan proteolitik lebih efisien. Langkah ini juga akan memutus jembatan antar rantai dalam kasus protein multi-rantai yang memiliki jembatan disulfida yang menghubungkan rantai tersebut (misalnya antibodi monoklonal, mAb).
2. Pencernaan Protein Menggunakan Enzim
Tujuannya adalah untuk memecah protein menjadi peptida. Kami memilih enzim berdasarkan urutan teoritis protein dan pengetahuan tentang pencernaan teoritis protein oleh enzim. Memilih enzim dengan cara ini, akan menghasilkan analisis pemetaan peptida terbaik.
3. Analisis Peptida yang Dicerna Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik On-line dengan Deteksi Spektrometri Massa Ultraviolet (UV) dan Electrospray (LC/ES-MS).
Pemisahan peptida berdasarkan polaritas menggunakan LC (reversephase-LC)
Saat peptida terelusi dari kolom LC, spektrometer massa akan menghasilkan informasi massa bersama dengan informasi ion fragmen, yang memungkinkan kita menentukan informasi urutan. Kami menggunakan informasi urutan untuk mengonfirmasi identitas peptida dan memberikan informasi primer.
Kami juga dapat menghasilkan informasi fragmentasi dari peptida saat mereka memasuki sumber spektrometer massa dari kolom LC. Tergantung pada persyaratan penelitian, ini adalah LC-MS/MS selektif atau non-selektif, yang dapat dianggap sebagai bentuk tandem MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
