Protein rekombinan sering kali mengalami oksidasi rantai samping asam amino yang terbuka, seperti triptofan (Trp) dan metionin (Met), sehingga mengubah sifat fisikokimia protein. Perubahan-perubahan ini pada gilirannya dapat berkontribusi terhadap perubahan fungsi biologis dari protein yang terpengaruh, seperti hilangnya ikatan, penurunan aktivitas enzimatik, dan pembersihan cepat yang tidak terduga. Protein adalah target penting untuk reaksi oksidatif karena mereka bereaksi cepat dengan oksidan dan melimpah di sel, jaringan ekstraseluler, dan cairan tubuh.
Oleh karena itu, pemantauan oksidasi protein sangat penting untuk keberhasilan pengembangan biofarmasi.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan layanan analisis oksidasi asam amino, yang memungkinkan Anda menentukan oksidasi asam amino dengan Kromatografi Cair-Spektrometri Massa (LC-MS).
Kami telah terlibat dalam Karakterisasi Struktur Protein berbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodi/ VHH/ Antibodi domain tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Persyaratan Peraturan untuk Oksidasi Asam Amino
Menurut pedoman ICH Q6B, bentuk teroksidasi dapat dideteksi dan dikarakterisasi dengan metode kromatografi, elektroforesis dan/atau analisis lain yang relevan (misalnya, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC), elektroforesis kapiler, spektroskopi massa, dikroisme sirkular).
Metode analitis
| Analisis |
metode |
| Oksidasi Asam Amino |
LC-MS, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik (RP-HPLC) atau Kromatografi Interaksi Hidrofobik Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HIC-HPLC) dan spektrometri massa |
Prosedur Analitis
1. Persiapan sampel
2. LC-MS
3. Analisis data
Residu triptofan (Trp) sangat rentan terhadap oksidasi karena tingginya reaktivitas indol aromatik dengan spesies oksigen reaktif. Oksidasi Trp memerlukan paparan residu Trp yang biasanya terkubur dalam struktur tiga dimensi protein.
Namun, ketika residu Trp dioksidasi, residu tersebut dapat berubah menjadi berbagai produk dengan sifat yang sangat berbeda dari Trp asli. Jalur paling umum untuk oksidasi Trp meliputi pembentukan N-formilkinurenin (Perbedaan massa: +32).
Asam amino lain yang sering teroksidasi adalah metionin. Atom belerang dalam residu Met dapat menerima satu atau dua atom oksigen yang mengarah pada pembentukan sulfoksida (Perbedaan massa: +16) atau sulfon (Perbedaan massa: +32). Modifikasi ini relatif umum karena tingginya paparan permukaan Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
