Pemetaan N-glikan sangat penting untuk produksi biopharmasi. Yaohai Bio-Pharma menyediakan layanan pemetaan N-glikan menggunakan Kromatografi Likuid-Spektrometri Massa (LC-MS) dari glikan yang dilepaskan dan diberi label. Langkah-langkah umum untuk menyiapkan sampel N-glikan meliputi pencernaan protein glikosa (GP), penghilangan glikosa, pemurnian, pemberian label/derivatisasi, dan Ekstraksi Fase Padat (SPE).
Kami telah terlibat dalam Karakterisasi Struktur Protein dari berbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/VHHs/ Antibodi Domain Tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Persyaratan Regulasi untuk Pemetaan N-Glikan
Menurut panduan ICH Q6B, “untuk glikoprotein, kandungan karbohidrat (gula netral, gula amino, dan asam sialik) ditentukan. Selain itu, struktur rantai karbohidrat, pola oligosakarida (profil antena), dan situs glukosilasi dari rantai polipeptida dianalisis sejauh mungkin.
Metode Analitis
| Analisis |
Metode |
| Profiling N-glikan |
Analisis Likuid Kromatografi-Spektrometri Massa (LC-MS) dari glikan yang dilepaskan dan dilabeli |
Prosedur
1. Pelepasan glikan enzimatik dengan Peptide N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Derivatisasi glikan yang dilepaskan oleh 2-aminobenzamide (2-AB)
3. Purifikasi N-glikan yang dipanen pada kolom TSK Amide - 80 jika jumlah besar deterjen, garam tak mudah menguap, atau bahan dengan kelompok amino bebas hadir
4. Penandaan dengan 2-aminobenzamide (2-AB) fluoresen
5. Analisis LC-MS dari N-glikan yang dilabeli
6. Analisis data
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
