Signifikansi Pengembangan Proses Hilir (DSP)
Seluruh brot fermentasi mengandung protein target atau plasmid, serta kontaminan terkait produk dan proses, misalnya, agregat, substrat sel mikroba, Protein Sel Induk (HCP), DNA Sel Induk (HCD), endotoksin, dan antibiotik.
Oleh karena itu, sangat penting untuk merancang DSP yang efisien, proses pemurnian, untuk menghilangkan kontaminan tertentu dan menghasilkan zat obat yang sangat murni dan berkualitas tinggi. Selain itu, optimasi proses pemurnian dapat membantu meningkatkan pemulihan produk, mengurangi biaya, dan meningkatkan skalabilitas dan keandalan proses.
Kata kunci: pengembangan proses, optimasi, dan validasi, proses pemurnian, kromatografi, eliminasi imputitas, penghilangan HCP, eliminasi HCD, penghilangan endotoksin, denaturasi protein dan refolding, perakitan VLP, konjugasi
Aplikasi: industri biopharmaceutical, obat manusia, obat hewan, vaksin, biologis molekul besar rekombinan, biologis rekombinan, reagen biologis
Solusi DSP dari Yaohai Bio-Pharma
Kami memiliki pengalaman luas dalam mengisolasi protein target atau plasmid dari matriks yang kompleks dengan mengembangkan dan mengoptimalkan proses pemurnian hilir. Ada berbagai jenis operasi unit yang sesuai untuk pemurnian biologis, termasuk sentrifugasi, filtrasi, homogenisasi, lisis alkaline, ultrafiltrasi, presipitasi, denaturasi protein dan refolding, kromatografi, dll.
Layanan pengembangan pemurnian yang tersedia meliputi:
- Pengembangan seluruh proses pemurnian dari pengumpulan sel atau supernatan hingga bahan aktif akhir.
- Optimisasi proses pemurnian berdasarkan kontaminan terkait produk dan proses untuk meningkatkan kualitas dan keamanan produk, misalnya, HCP, HCD, endotoksin.
- Pendefinisian dan optimisasi parameter kunci dalam satu atau beberapa operasi unit, termasuk lisis sel, filtrasi aliran tangensial, penyaringan resin, kromatografi, denaturasi protein, dan refolding, dll.
- Optimisasi proses dalam hal kualitas, hasil, pemulihan, biaya, dan skalabilitas.
- Validasi proses pemurnian hilir.
- Penilaian rentang parameter berbasis risiko dan Desain Eksperimen (DoE) dalam pemodelan proses.
Detail Layanan
Platform pemurnian protein atau plasmid standar didasarkan pada langkah-langkah pemurnian kasar yang banyak dan kurang dari 4 langkah kromatografi, termasuk penangkapan, pemurnian menengah, dan finishing.
| Detail Layanan |
Operasi Unit |
Parameter |
| Pemurnian Kasar |
Sentrifugasi |
Kecepatan Rotasi, Waktu |
| Homogenisasi Tekanan Tinggi |
Kandungan Total Padatan, Tekanan, Siklus |
| Lisis Alkalin Kontinu |
Rasio Sel yang Diresuspend ke Larutan Lisis, Waktu Lisis |
| Filtrasi Aliran Tangensial |
Bahan Membran dan Ukuran Poros, Debit Umpan Transmembrane Pressure (TMP), Rasio Volume Filtrat ke Luas Membran |
| Pengendapan |
Jenis dan Konsentrasi Pengendap, Aditif, pH, Suhu, Waktu |
| Denaturasi dan Refolding |
Solubilisasi Protein Badan Inklusi |
Konsentrasi Denaturan (misalnya, Urea, Guanidin HCl, Sabun Ionik Kuat), Sabun (misalnya, Sodium dodecyl sulfate, SDS), Agen Pengurang (misalnya, Dithiothreitol, DTT), Agen Pengikat (Etylenediaminetetraasetat, EDTA), Suhu, Waktu |
| Penyerapan ulang protein |
Metode Penyerapan Ulang (pengenceran, dialisis atau penyerapan ulang SEC), Konsentrasi Protein, Buffer, pH, Suhu, Waktu, Agen Oksidasi dan Reduksi (misalnya, Glutathione, GSH/Oksidasi Glutathione, GSSH, DTT/GSSH, Cistein/Cistin), Aditif Molekul Kecil (L-arginin, Urea, Guanidin/HCl, dan Sabun) |
| Penangkapan, Pemurnian Perantara, dan Polish |
AC (Kromatografi Afinitas) |
Beberapa jenis resin/kolom kromatografi (misalnya, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Panjang dan Diameter Kolom, Komposisi Buffer, Volume Injeksi, Komposisi Fasa Mobile (Adsorpsi dan Desorpsi), pH, Tingkat Aliran, Kondisi Pengikatan, Pencucian, dan Elusi. |
| IEX (Kromatografi Pertukaran Anion atau Kation) |
| HIC (Kromatografi Interaksi Hidrofob) |
| Desalting dan/atau kromatografi eksklusi ukuran (SEC) |
| RPC (Reversed Phase Chromatography) |
| MMC, Kromatografi mode campuran |
Studi Kasus
Kasus 1
Kami diberi tugas untuk mengembangkan dan mengoptimalkan proses pemurnian downstream guna meningkatkan kekotoran protein dari 85% menjadi 90% sambil mengurangi langkah-langkah kromatografi.
Yaohai memberikan proses pemurnian yang tangguh dan dapat diskalakan dengan 3 langkah kromatografi untuk protein target, yaitu alergi bakteri. Dan kekotoran akhir mencapai 95%.
Kasus 2
Yaohai ditunjuk oleh klien kami untuk mengoptimalkan proses penghilangan endotoksin dari vaksin partikel mirip virus (VLP).
Tim kami melakukan optimasi parameter kromatografi dan menyiapkan zat obat dengan kekotoran 98% dan residu endotoksin 12,8EU/mg.
Pengalaman kami
- Kami telah terlibat dalam pengembangan dan manufaktur berbagai molekul besar, termasuk vaksin subunit rekombinan, VLPs, hormon (insulin, GLP-1, hormon pertumbuhan), sitokin (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), faktor pertumbuhan (EGF, FGF, NGF), nanobodies/antibodi domain tunggal (sdAbs), enzim, dll.
Peralatan
Kami menggunakan sistem AKTA Pure, AKTA Avant, dan HPLC Praparatif yang memimpin industri untuk melaksanakan berbagai metode kromatografi termasuk afinitas, pertukaran ion, interaksi hidrofobik, fase terbalik, dan kromatografi eksklusi ukuran.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
