Protein rekombinan sering mengalami oksidasi pada rantai samping asam amino yang terpapar, seperti triptofan (Trp) dan metionin (Met), yang mengubah sifat fisikokimia protein. Perubahan ini dapat berkontribusi pada perubahan fungsi biologis protein yang terkena dampak, seperti kehilangan ikatan, pengurangan aktivitas enzimatik, atau pembersihan yang tidak terduga dan cepat. Protein merupakan target penting untuk reaksi oksidatif karena bereaksi dengan cepat dengan oksidan dan melimpah di dalam sel, jaringan ekstraseluler, dan cairan tubuh.
Oleh karena itu, pemantauan oksidasi protein sangat krusial untuk pengembangan bioteknologi farmasi yang sukses.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan layanan analisis oksidasi asam amino, yang memungkinkan Anda menentukan oksidasi asam amino dengan Kromatografi Likuid-Spektrometri Massa (LC-MS).
Kami telah terlibat dalam Karakterisasi Struktural Protein dari berbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/ VHHs/ Antibodi Single-domain (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Persyaratan Regulasi untuk Oksidasi Asam Amino
Menurut panduan ICH Q6B, bentuk-bentuk oksidasi dapat dideteksi dan dikarakterisasi dengan metode analitis kromatografi, elektroforesis, dan/atau metode lain yang relevan (misalnya, Kromatografi Likuid Fase Tinggi (HPLC), elektroforesis kapiler, spektrometri massa, dikhroisme lingkaran).
Metode Analitis
| Analisis |
Metode |
| Oksidasi Asam Amino |
LC-MS, Kromatografi Likuid Fase Tinggi Fase Terbalik (RP-HPLC) atau Kromatografi Interaksi Hidrofob Likuid Fase Tinggi (HIC-HPLC) dan spektrometri massa |
Prosedur Analitis
1. Persiapan Sampel
2. LC-MS
3. Analisis data
Residu Tryptophan (Trp) sangat rentan terhadap oksidasi karena reaktivitas tinggi dari indol aromatik dengan spesies oksigen reaktif. Oksidasi Trp memerlukan adanya paparan residu Trp yang biasanya tersembunyi dalam struktur tiga dimensi protein.
Namun, ketika residu Trp mengalami oksidasi, mereka dapat berubah menjadi berbagai produk dengan sifat yang sangat berbeda dari Trp asli. Jalur oksidasi Trp yang paling umum meliputi pembentukan N-formylkinurenin (Perbedaan massa: +32).
Asam amino yang sering dioksidasi lainnya adalah methionine. Atom belerang dalam residu Met dapat menerima satu atau dua atom oksigen yang mengarah pada pembentukan sulfoxida (Perbedaan massa: +16) atau sulfona (Perbedaan massa: +32), sesuai dengan itu. Modifikasi ini cukup umum karena paparan permukaan Met yang biasanya tinggi.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
