Rekombináns fehérjetermelés: módosított E. coli törzsek

Az Escherichia coli (E. coli) jelentős szerepet játszott a rekombináns fehérjék előállításában a biofarmakon iparban, és ez az első expressziós vektor a biológiai gyógyszergyártásban. Az E. coli gyors növekedéssel, kényelmes genetikai manipulációval és a rekombináns fehérjék gyors szintézisével büszkélkedhet, egyéb előnyök mellett. A kiterjedt módosítások az E. coli-t a fehérjeexpresszió optimális választásává tették, ami különféle módosított E. coli törzsek tervezéséhez vezetett.

A Yaohai Bio-Pharma egyablakos outsourcing szolgáltatások nyújtására specializálódott a fermentáció, tisztítás, formulázási folyamatok fejlesztése és biogyógyszer-sorozat E. coli expressziós rendszerek felhasználásával történő előállításához. A Yaohai széleskörű tapasztalataira tekintettel összefoglaltuk, hogy négy elterjedt E. coli törzset használnak rekombináns fehérjetermelésre és azok jellemzőit.

BL 21 törzs

Az E. coli B vonalból származó BL21 törzsből hiányzik a Lon proteáz és az OmpT külső membrán proteáz. A lon proteáz elsősorban az exogén fehérjéket, míg az OmpT főként az extracelluláris mátrix fehérjéket bontja le. E két kulcsfontosságú proteáz hiánya hatékonyan megakadályozhatja a rekombináns fehérjék lebomlását.

Origami törzs

Az Origami törzs, az E. coli K-12 származéka a tioredoxin-reduktázban és a glutation-reduktázban mutációkat tartalmaz, amelyek elősegítik a diszulfidkötéseket tartalmazó, megfelelően összetekeredő fehérjék kialakulását és javítják a fehérje oldhatóságát. Az Origami törzs, köztük az Origami, Origami 2 és Origami B, alkalmas diszulfidkötéseket tartalmazó aktív fehérjék expressziójára.

SHuffle törzs

A SHuffle törzs konstitutívan expresszálja a DsbC diszulfid kötés izomerázt a citoplazmában, elősegítve a megfelelő diszulfid kötések kialakulását az oxidált fehérjékben. Molekuláris chaperonként is szolgál a fehérjék hajtogatásához, segítve a megfelelő konformáció kialakulását.

Rosetta törzs

A Rosetta törzs ritka kodonoknak megfelelő tRNS-ekkel egészíti ki az E. coli-t azzal a céllal, hogy javítsa az exogén gének, különösen az eukarióta gének expressziós szintjét prokarióta rendszerekben. A BL21-ből származó és a kloramfenikol-rezisztens pRARE plazmidot hordozó hat tRNS-t egészít ki, amelyek az E. coliban eredetileg hiányzó, ritka kodonoknak (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC és GGA) felelnek meg, ezáltal "univerzálisabb" fehérjeexpressziót biztosítanak.

Következtetés

A rekombináns fehérjék sikeres termelésének három fő tényezője a gazdaszervezet, a vektor és a tenyésztési körülmények. A rekombináns fehérje fizikai-kémiai tulajdonságainak, az egyes törzsek egyedi előnyeinek és a kísérlet speciális igényeinek ismerete alapján kell kiválasztani a legmegfelelőbb gazdaszervezetet. Ezenkívül az olyan faktorokat, mint a plazmidvektorok, a hőmérséklet és az induktorok optimalizálni kell a fehérje expressziójának fokozása érdekében.

A Yaohai Bio-Pharma emellett aktívan keres intézményi vagy egyéni globális partnereket, és az iparág legversenyképesebb javadalmazását kínálja. Ha kérdése van, forduljon hozzánk bizalommal: [email protected]