Az eGFP mRNS gyártási folyamata

Az eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNS előállítása egy sor molekuláris biológiai technikát foglal magában az eGFP expresszióját kódoló funkcionális RNS molekula előállítására. Az eGFP mRNS területén a Yaohai Bio-Pharma széleskörű tapasztalattal rendelkezik az ügyfelek speciális igényeinek kielégítésében. Tapasztalatainkat felhasználva szintetizáltuk az EGFP mRNS előállításának folyamatát.

1. Az eGFP gén klónozása: Az eGFP-t kódoló génszekvencia beszerzése. Ezt a gént jellemzően egy már létező plazmidvektorból klónozzák, vagy mesterségesen szintetizálják az ismert nukleotidszekvencia alapján. A klónozott gént ezután szekvenálással ellenőrizzük a pontosság biztosítása érdekében.
2. Gén optimalizálás az expresszióhoz: A célrendszerben (pl. emlőssejtekben, baktériumokban vagy in vitro transzkripciós rendszerekben) történő optimális expresszió érdekében az eGFP gén kodonoptimalizáláson eshet át. Ez magában foglalja az eredeti szekvencia ritka kodonjait a gazdaszervezetben gyakrabban használt kodonokkal helyettesítve, növelve a hatékony transzláció esélyét.
3. In vitro Átírási sablon előkészítése: Ha az optimalizált gén készen áll, beépül egy megfelelő vektorba, gyakran egy plazmidba, amely tartalmazza a transzkripcióhoz szükséges szabályozó elemeket (pl. promóter szekvencia). Ez a plazmid templátként szolgál az in vitro transzkripcióhoz.
4. In vitro Átírás: Az elkészített plazmid templát felhasználásával in vitro transzkripciót végzünk az eGFP mRNS szintetizálására. Ez a folyamat magában foglalja az RNS-polimeráz enzimek használatát, amelyek felismerik a promoterszekvenciát, és elindítják a transzkripciót, és a DNS-templáthoz komplementer RNS-szálat állítanak elő. A kívánt alkalmazástól függően az mRNS lezárható, poliadenilezhető és/vagy módosítható a stabilitás és a transzlációs hatékonyság fokozása érdekében.
5. Tisztítás és minőségellenőrzés: A szintetizált eGFP mRNS-t ezután megtisztítják, hogy eltávolítsák a szennyeződéseket, beleértve a DNS-t, a fehérjéket és a szabad nukleotidokat. A tisztítási módszerek közé tartozik a gélelektroforézis, az oszlopkromatográfia vagy a gyöngy alapú elválasztás. A tisztítást követően az mRNS minőségét elemzik, beleértve a koncentrációt, tisztaságot és integritást olyan technikák alkalmazásával, mint az UV-Vis spektrofotometria és a gélelektroforézis.
6. Tárolás és szállítás: A tisztított eGFP mRNS-t jellemzően alacsony hőmérsékleten tárolják a stabilitás megőrzése érdekében. Kísérleti felhasználásra az mRNS különböző módszerekkel juttatható be a sejtekbe, beleértve az elektroporációt, a lipofekciót vagy a vírusvektorokat, az adott alkalmazástól és a célsejt típusától függően.
7. Kifejezés és ellenőrzés: A sejtbe jutva az eGFP mRNS a fokozott zöld fluoreszcens fehérjévé alakul, amely fluoreszcens mikroszkóppal láthatóvá válik. Ez lehetővé teszi a sikeres mRNS termelés, szállítás és expresszió ellenőrzését.

Összefoglalva, az eGFP mRNS előállítása magában foglalja a gén klónozását, az expresszió optimalizálását, az in vitro transzkripciós templát elkészítését, a transzkripciós reakció végrehajtását, a kapott mRNS tisztítását, végül pedig a sejtekbe juttatását expresszió és ellenőrzés céljából.

Aktívan keresünk intézményi vagy egyéni globális partnereket is. Az iparág legversenyképesebb javadalmazását kínáljuk. Ha kérdése van, forduljon hozzánk bizalommal: [email protected]