Az eGFP mRNA gyártási folyamata

Az eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA előállítása egy sor molekuláris biológiai technikát igényel, hogy funkcionális RNA-molekula legyen előállítva, amely kódol az eGFP kifejezésére. Az eGFP mRNA területén a Yaohai Bio-Pharma széles körű tapasztalattal rendelkezik a vevők speciális igényeinek megfelelésében. Tapasztalatok alapján összeállítottuk az EGFP mRNA előállítás folyamatát.

1. Az eGFP gén klónozása : Ennek érdekében beszerezni kell azt a gén-sorozatot, amely kódol az eGFP-hez. Ez a gén általában egy korábban létező plazmidvektorból klónázik vagy mesterszerűen szintetizálják a ismert nukleotid-sorozat alapján. A klónált génet sorozati elemzéssel ellenőrizik annak pontos biztosítására.
2. Gén optimalizálás kifejezéshez : A legjobb kifejezés érdekében a célrendszerben (pl. emlős sejtek, baktériumok vagy in vitro transkripsziós rendszerek), az eGFP gén kodonoptimalizációt vehet át. Ez azt jelenti, hogy az eredeti sorozat ritkaságos kodonsorozatait a gazdaszervezetben gyakrabban előfordulókkal helyettesítik, ami növeli a hatékony fordítás valószínűségét.
3. In vitro Transzkripciói sablon elkészítése : Amint az optimalizált gén készen van, beépíthető egy alkalmas vektorba, gyakran plazmidba, amely tartalmazza a transzkripcióhoz szükséges szabályozói elemeket (pl. promotor sorozat). Ez a plazmid szolgál sablonként az in vitro transzkripcióhoz.
4. In vitro Transzkripció : A készített plazmid-sablon használatával in vitro transkripciót végeznek az eGFP mRNA szintéziséhez. Ez a folyamat RNA polymeráz enzimek használatát igényli, amelyek felismerik a promotor sorozatot és elindítják a transzkripciót, természetes RNA-szálakat gyártva a DNA-sablonhoz komplementárisan. A kívánt alkalmazások függvényében az mRNA fejleszthető, poliadenilálható és/vagy módosítható a stabilitás és a fordítási hatékonyság növelése érdekében.
5. Tisztítás és minőségbiztosítás : Az eGFP mRNA-t tisztítják bármi kontaminánsból, beleértve a DNA-t, fehérjeit és szabad nukleotidokat. A tisztítási módszerekbe gel-elektroforézis, oszlop-kromatográfia vagy részből függő elválasztás tartozhat. A tisztítás után az mRNA elemzi a minőségét, beleértve a koncentrációt, tisztaságot és integritást, technikákkal, mint például UV-Vis spektrofotometria és gel-elektroforézis.
6. Tárolás és kézbesítés : Az egzakt eGFP mRNA általában alacsony hőmérsékleten tároljuk a stabilitás fenntartása érdekében. Kísérleti használatra az mRNA-t különböző módszerekkel lehet szállítani a sejtbe, beleértve az elektroporációt, a lipofekciót vagy vírusvektorokat, attól függően, hogy mi a konkrét alkalmazás és a célsejt típusa.
7. Kifejezés és Ellenőrzés : Amint a sejt belseőbe kerül, az eGFP mRNA fordítja le az erősített zöld fluoreszcens fehérje (enhanced green fluorescent protein) formájába, amelyet fluoreszcens mikroszkóp használatával vizualizálhatunk. Ez lehetővé teszi a sikeres mRNA gyártás, szállítás és kifejezés ellenőrzését.

Összefoglalva, az eGFP mRNA gyártása azt jelenti, hogy klónozzuk a génet, optimalizáljuk annak kifejezésére, készítünk in vitro transkripciói sablont, végrehajtjuk a transkripciói reakciót, tisztítjuk az eredményül kapott mRNA-t, és végezetül szállítjuk azt a sejtbe a kifejezés és az ellenőrzés céljából.

Aktívan keresünk intézményi vagy egyéni globális partnereket. A legversenyképesebb kompenzációt kínáljuk az iparágban. Ha bármilyen kérdése van, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot: [email protected]