IVT mRNS készítés

Az in vitro transzkripció (IVT) az előnyben részesített módszer az mRNS előállítására, amely laboratóriumi méretekben képes mikrogrammtól milligrammig terjedő mRNS előállítására. Kutatási célokra a reagens beszállítók sokoldalú IVT reakciórendszereket fejlesztettek ki, amelyek alkalmasak közepes hosszúságú (1000-4000 nukleotid) mRNS-re.

Ebben a cikkben az mRNS in vitro transzkripcióját (IVT) foglaljuk össze, beleértve a hagyományos, laboratóriumi méretekben használt IVT reakciórendszert és az ultrahosszú mRNS-re (>9000 nukleotid) alkalmas IVT reakciórendszert.

A készletek lehetővé teszik a ko-transzkripciós korlátot a CleanCap AG-val, és csökkentik az immunogenitást az m1ψ-vel. A DNáz I eltávolítja a maradék DNS-t. Az alacsony kitermelés oka lehet a rossz keverés, a reagens oxidációja vagy a DNS-templát problémák, amelyek enyhíthetők centrifugálással, friss reagensekkel, kontrollokkal és a templát mennyiségének/reakcióidejének beállításával.

A Yaohai Bio-Pharma különféle előregyártott IVT RNS termékeket (folyékony/fagyasztva szárított por) és LNP késztermékeket kínál, amelyek fehérjéket, például fluoreszcens fehérjéket (eGFP, mCHERRY), luciferázt, Cre rekombinázt és antigén OVA-t kódolnak, hogy megfeleljenek a különböző kísérleteknek vagy projekteknek. igények.

IVT rendszer ultrahosszú mRNS-hez

Előfordulhat, hogy a hagyományos IVT nem működik túl hosszú mRNS esetén (>9000 nt). Az IVT összetevőinek mély megértésére és racionális beállítására van szükség.

DNS sablon: Linearizált plazmidok vagy PCR-termékek megfelelő promoterszekvenciákkal, RNáz-mentes H2O-ban oldva. Az optimális IVT-körülményekhez 40 nM-nál magasabb DNS-templát-koncentráció javasolt.

DTT: Fenntartja az enzimaktivitást a transzkripció során. Az optimális enzimaktivitás érdekében friss DTT-t kell hozzáadni a reakciópufferhez.

RNáz inhibitor: Gátolja az RNáz aktivitást és fenntartja az mRNS stabilitását.

T7 RNS polimeráz: Katalizálja a DNS-transzkripciót RNS-vé, a promoterszekvenciának megfelelően. A T7 RNS polimeráz aktivitását a pH és a magnéziumionok befolyásolják.

Magnéziumionok (Mg2+): Az RNS polimeráz kofaktora. A túl alacsony koncentráció csökkenti a transzkripció hatékonyságát, míg a túl magas koncentráció az RNS lebomlásához vezet. A szabad [Mg2+] értékét a nukleotidkoncentráció alapján kell beállítani. Minden nukleotid egy [Mg2+] kelátot képez, így a [Mg2+] koncentrációnak meg kell haladnia a teljes nukleotid koncentrációt.

Nukleozid-trifoszfátok (NTP): Szubsztrátként az NTP-k az RNS alapegységei. A 7 mM feletti NTP koncentráció pozitív hatással van az mRNS termelésre.

Spermidin: Stabilizálja a DNS-enzim komplexeket és serkenti a transzkripciós reakciókat; a túlzott koncentráció azonban gátló hatású. A spermidin ajánlott koncentrációja 1 és 3 mM között van.

Szervetlen pirofoszfatáz (PPáz): Az IVT reakciókhoz hozzáadva megakadályozza a szervetlen pirofoszfát ionok (PPi) felhalmozódását, elkerülve azok Mg2+-mal való kelátképződését és elegendő szabad Mg2+-t biztosítva.

Az úttörő technológiát és az IVT mRNS tapasztalatait kihasználva a Yaohai Bio-Pharma egyablakos IVT RNS szolgáltatást biztosít, amely magában foglalja a szekvenciatervezést, az IVT RNS előkészítését (m1ψ modokkal), az RNS ciklizálását, a tisztítást, a fagyasztva szárítást, az LNP kapszulázását és a minőségi tesztelést.

Aktívan keresünk intézményi vagy egyéni globális partnereket is. Az iparág legversenyképesebb javadalmazását kínáljuk. Ha kérdése van, forduljon hozzánk bizalommal: [email protected]