Innovatív gyártási technikák nagyméretű gén szintézishez

A nagy DNA-töredékek nélkülőző gyártására szolgáló gyüjtési technológia a gén-szintézis alapköve, amely magában foglal módszereket, mint például a BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson-gyüjtés, CPEC és Overlap PCR. A jelenlegi technológia korlátozott képessége miatt a génszintű hosszúságú DNA pontos egylépéses szintéziséhez szükség van in vitro és in vivo gyüjtési technikák kombinálására a szakaszokban szintetizált oligonukleotid-töredékek hosszú DNA-töredékekkel való összegyűjtéséhez.

In vitro gyüjtési technikák

Különböző módszereik szerint osztják szét törések méretére és sorozati jellemzőire, közös követelmény a gyűrő enzim használatára. Az overlap PCR, amely a DNA polymeráz módszeren alapszik, egyszerű és gyors művelet. A BioBrick és BglBrick módszerek, amelyek az izoschizomerákon alapulnak, lehetővé teszik a szabványosított gyüjtést, bár a BioBrick módszer nem alkalmas fúziós fehérjékhez. A Golden Gate klónozás módszer, amely típus IIS korlátozó enzimeken alapszik, lehetővé teszi több törzs hatékony, csatlakoztatás nélküli összefűzését. A Gibson-gyűjtési módszer, amely több gyűrő enzim kombinációját használja, csatlakoztatás nélküli összefűzést tesz lehetővé, és a törzs mérete százainak kb-ig elérhető. A DNA-komponensek szabványos tervezése növeli a meglévő törzsök hasznosítási arányát.

Élőben történő gyüjtési technikák

Bár... in vitro a gyüjtött törzsok mérete százainak kb-ig elérhető, gyakran elégséges a termék, amelyet szervezetekkel kell amplifikálni, például Escherichia coli. A 20 kb-nál hosszabb fragmentumok gyüjtéséhez gyakran használnak rekombináns rendszereket az élettelen szervezetekben, beleértve a Bacillus subtilist, a kvaszt és a módosított baktériumokat. A kvasz, mint gyakran használt gazdaszervezet, évek óta ismert arra, hogy hatékony homológ rekombinációs képességgel rendelkezik. Használni lehet olyan mesterséges kromoszómák összerakására, amelyek több megabázis (Mb) hosszúságúak lehetnek. Emellett a Saccharomyces cerevisiae kiváló toleranciát mutat a kromoszómahosszhoz, amely elméleti alapot biztosít a kvasz használatára ultra-hosszú kromoszómák konstruálására magasabb szervezetekben.

Alkalmazások

A Yaohai Bio-Pharma két gyártási módszert használ főként a génszintézis során: ligázós és DNA polymeráz gyűrűsítést. A ligázós módszer 5'-foszfátos oligonukleotid-töredékeket kapcsol össze, amelyek átfedésben és hibridizációban részt vesznek, így kétszeres spirálfonalú DNA-t teremt a DNA ligáz segítségével. A polymeráz gyűrűsítési módszer pedig DNA-polymerázat használ annak érdekében, hogy hosszabb nukleotid-sorozatokat hibridizáljon, és egy különféle hosszúságú vegyes anyagot kapjon, végül pedig speciális primerekkel amplifikálja a sikeresen gyűrűsített teljes hosszúságú töredékeket. A Yaohai segítségével a kliensek kielégíthetik az egyedi igényeiket a génszintézis terén.

Aktívan keresünk intézményi vagy egyéni globális partnereket. A legversenyképesebb kompenzációt kínáljuk az iparágban. Ha bármilyen kérdése van, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot: [email protected]