Innovatív összeszerelési technikák nagy léptékű génszintézishez

A génszintézis sarokköve a nagy DNS-fragmensek szintetizálásának összeszerelési technológiája, amely olyan módszereket foglal magában, mint a BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson-összeállítás, CPEC és Overlap PCR. A jelenlegi technológia korlátai miatt a génhosszúságú DNS egy lépésben történő pontos szintézisében, szükséges az in vitro és in vivo összeállítási technikák kombinálása a szegmensekben szintetizált oligonukleotid-fragmensek hosszú DNS-fragmensekké történő összeállításához.

In vitro összeszerelési technikák

A fragmentumok mérete és a szekvencia jellemzői alapján különböző módszerekbe sorolják őket, amelyek közös követelményei az eszközenzimek használatának. A DNS polimeráz módszeren alapuló átfedő PCR egyszerű és gyors működésű. Az izoschizomereken alapuló BioBrick és BglBrick módszerek szabványos összeszerelést tesznek lehetővé, bár a BioBrick módszer nem alkalmas fúziós fehérjékre. Az IIS típusú restrikciós enzimeken alapuló Golden Gate klónozási módszer lehetővé teszi több fragmentum hatékony zökkenőmentes ligálását. A Gibson összeállítási módszer, amely több eszközenzim kombinációját alkalmazza, lehetővé teszi a zökkenőmentes ligálást több száz kb-t elérő fragmentummérettel. A DNS-komponensek szabványosított kialakítása növeli a meglévő fragmentumok felhasználási arányát.

In vivo összeszerelési technikák

Bár in vitro Az összeállított fragmentumok elérhetik a több száz kb nagyságot, a hozam gyakran nem elegendő, ami szükségessé teszi az olyan organizmusok felhasználásával történő amplifikációt, mint pl. Escherichia coli. A 20 kb-nál nagyobb fragmensek összeállításánál gyakran alkalmaznak szervezeteken belüli rekombináns rendszereket, beleértve a Bacillus subtilist, az élesztőt és a mesterséges baktériumokat. Az élesztőt, mint általánosan használt gazdaszervezetet, sok éve elismerték hatékony homológ rekombinációs képességéről. Több megabázis (Mb) hosszúságú mesterséges kromoszómák összeállítására használható. Ezenkívül a Saccharomyces cerevisiae rendkívüli toleranciát mutat a kromoszómahosszra, elméleti alapot biztosítva az élesztők felhasználásához ultrahosszú kromoszómák létrehozására magasabb rendű szervezetekben.

Alkalmazási területek

A Yaohai Bio-Pharma elsősorban két összeállítási módszert alkalmaz a génszintézishez: a ligáz-összeállítást és a DNS-polimeráz-összeállítást. A ligáz összeállítási módszer az átfedő és hibridizált 5'-foszforilált oligonukleotid fragmentumokat kettős szálú DNS-be köti DNS-ligáz segítségével. A polimeráz-összeállítási módszer DNS-polimerázt használ az átfedő oligonukleotid-fragmensek hibridizációval történő kiterjesztésére, különböző hosszúságú keverékek előállítására, és végül a sikeresen összeállított teljes hosszúságú fragmensek láncindítók segítségével történő amplifikálására. A Yaohai's segíthet az ügyfeleknek a génszintézis speciális követelményeinek kielégítésében.

Aktívan keresünk intézményi vagy egyéni globális partnereket is. Az iparág legversenyképesebb javadalmazását kínáljuk. Ha kérdése van, forduljon hozzánk bizalommal: [email protected]