Explora el fascinante mundo de la precipitación de cloruro de litio

La precipitación con cloruro de litio se utiliza ampliamente para separar el ARN de la solución.

Aquí está el desglose del proceso:

1. Preparación de la muestra: Comience con una muestra que contenga ARN, como in vitro mezcla de transcripción.

2. Adición de cloruro de litio: agregue un volumen apropiado de solución concentrada de cloruro de litio a la solución de ARN.

3. Incubación: Después de añadir cloruro de litio, la solución se incuba a baja temperatura, generalmente alrededor de -20 °C. Esto hace que las moléculas de ARN se precipiten fuera de la solución.

4. Centrifugación: Después de la incubación, la solución se centrifuga a alta velocidad. Esto separa el ARN precipitado del resto de la solución, que contiene impurezas.

5. Lavado: Una vez finalizada la centrifugación, retirar con cuidado el sobrenadante pero sin interferir en la precipitación del ARN. Lavar las partículas de ARN con etanol frío o alcohol isopropílico para eliminar las impurezas restantes.

6. Resuspensión del ARN: después del lavado, el precipitado de ARN se seca brevemente al aire y luego se vuelve a suspender en un tampón adecuado, como el tampón TE (tampón Tris-EDTA) o agua destilada. Puede ser necesario pipetear suavemente o aplicar corrientes de Foucault para resuspender adecuadamente el ARN.

7. Cuantificación y análisis: Por último, el ARN aislado se cuantifica mediante espectroscopia ultravioleta o método de fluorescencia. Esto determina la concentración y pureza de la muestra de ARN, lo que es importante para aplicaciones posteriores, como la encapsulación de LNP y la transfección celular.

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