Produkce rekombinantního proteinu: Upravené kmeny E. coli

Escherichia coli (E. coli) sehrála významnou roli při produkci rekombinantních proteinů v biofarmaceutickém průmyslu a sloužila jako první expresní vektor pro výrobu biologické medicíny. E. coli se mimo jiné může pochlubit rychlým růstem, pohodlnou genetickou manipulací a rychlou syntézou rekombinantních proteinů. Rozsáhlé modifikace učinily E. coli optimální volbou pro expresi proteinu, což vedlo k návrhu různých geneticky upravených kmenů E. coli.

Yaohai Bio-Pharma se specializuje na poskytování komplexních outsourcingových služeb pro fermentaci, purifikaci, vývoj formulačních procesů a výrobu řady biofarmaceutik pomocí expresních systémů E. coli. S ohledem na rozsáhlé zkušenosti Yaohai jsme shrnuli, že pro produkci rekombinantních proteinů a jejich vlastnosti se používají čtyři běžné kmeny E. coli.

Kmen BL 21

Kmen BL21, odvozený od E. coli B linie, postrádá Lon proteázu a vnější membránovou proteázu OmpT. Lon proteáza primárně degraduje exogenní proteiny, zatímco OmpT degraduje hlavně proteiny extracelulární matrix. Absence těchto dvou klíčových proteáz může účinně zabránit degradaci rekombinantních proteinů.

Origami kmen

Kmen Origami, derivát E. coli K-12, má mutace v thioredoxin reduktáze a glutathion reduktáze, které usnadňují tvorbu správně složených proteinů obsahujících disulfidové vazby a zvyšují rozpustnost proteinů. Kmen Origami, včetně Origami, Origami 2 a Origami B, jsou vhodné pro expresi aktivních proteinů obsahujících disulfidové vazby.

SHuffle kmen

Kmen SHuffle konstitutivně exprimuje disulfidovou vazbu izomerázu DsbC v cytoplazmě, čímž podporuje tvorbu správných disulfidových vazeb v oxidovaných proteinech. Slouží také jako molekulární chaperon pro skládání proteinů a pomáhá při vytváření správné konformace.

Rosetta kmen

Kmen Rosetta doplňuje E. coli o tRNA odpovídající vzácným kodonům s cílem zlepšit úroveň exprese exogenních genů, zejména eukaryotických genů, v prokaryotických systémech. Odvozen z BL21 a nesoucí plazmid pRARE rezistentní na chloramfenikol, doplňuje šest tRNA odpovídajících vzácným kodonům (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC a GGA), které se původně nevyskytovaly v E. coli, což poskytuje „univerzálnější“ proteinovou expresi.

Proč investovat do čističky vzduchu?

Tři hlavní faktory pro úspěšnou produkci rekombinantních proteinů jsou hostitel, vektor a kultivační podmínky. Na základě pochopení fyzikálně-chemických vlastností rekombinantního proteinu, jedinečných výhod každého kmene a specifických potřeb experimentu by měl být vybrán nejvhodnější hostitel. Kromě toho by měly být optimalizovány faktory, jako jsou plazmidové vektory, teplota a induktory, aby se zvýšila exprese proteinu.

Yaohai Bio-Pharma také aktivně hledá institucionální nebo individuální globální partnery a nabízí nejkonkurenceschopnější kompenzaci v oboru. Máte-li jakékoli dotazy, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]