Výroba rekombinantních bílkovin: Inženýrské řady E. coli

Escherichia coli (E. coli) sehr důležitou roli při výrobě rekombinantních bílkovin v biofarmaceutickém průmyslu, kde sloužila jako první expresní vektor pro výrobu biologického léku. E. coli má rychlý růst, snadnou genetickou manipulaci a rychlou syntézu rekombinantních bílkovin mezi dalšími výhodami. Rozsáhlé úpravy udělaly z E. coli ideální volbu pro expresi bílkovin, což vedlo ke vývoji různých inženýřských štras E. coli.

Yaohai Bio-Pharma se specializuje na poskytování kompletních externalizačních služeb pro fermentační, očistnou, formulací proces vývoje a produkce řady biopharmaceutik pomocí systémů expresních E. coli. Vzhledem k rozsáhlému zkušenostem Yaohai jsme shrnuli, že čtyři běžné štiny E. coli se používají pro produkci rekombinantních bílkovin a jejich charakteristiky.

BL 21 štám

Odvozeno od linie E. coli B, štám BL21 lackuje proteázu Lon a vnější membránovou proteázu OmpT. Proteáza Lon převážně degraduje exogenní proteiny, zatímco OmpT především degraduje proteiny extracelulární matrice. Absence těchto dvou klíčových proteáz může účinně zabránit degradaci rekombinantních proteinů.

Štám Origami

Štám Origami, derivát E. coli K-12, má mutace v thioredoxin reduktázi a glutathion reduktázi, které usnadňují tvorbu správně složených proteinů obsahujících disulfidové vazby a zvyšují rozpustnost proteinů. Štámy Origami, včetně Origami, Origami 2 a Origami B, jsou vhodné pro expresi aktivních proteinů obsahujících disulfidové vazby.

Štám SHuffle

Štamm SHuffle konstitutivně vyjadřuje izomerázu disulfidových vazeb DsbC v cytoplazmě, což podporuje tvorbu správných disulfidových vazeb v oxidovaných bělkách. Slouží také jako molekulární chaperon pro sčítání bílkovin, pomáhá při tvorbě správné konformace.

Štamm Rosetta

Štamm Rosetta doplňuje E. coli tRNA odpovídající vzácným kodonům, s cílem zlepšit úroveň expresce exogenních genů, zejména eukaryotických genů, v prokaryotických systémech. Odvozen od BL21 a nesoucí chloramfenikolodolný plazmid pRARE, doplňuje šest tRNA odpovídajících vzácným kodonům (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC a GGA), které původně chybí v E. coli, poskytuje tak více "univerzální" expresi bílkovin.

Závěr

Tři hlavní faktory pro úspěšnou produkci rekombinantních bílkovin jsou nositel, vektor a podmínky kultivace. Na základě pochopení fyzikálně-chemických vlastností rekombinantního bílkovinného látky, jedinečných výhod každého šťamu a konkrétních potřeb experimentu by měl být vybrán nejvhodnější nositel. Navíc by měly být optimalizovány faktory jako plazmidové vektory, teplota a induktory pro zvýšení expresivity bílkoviny.

Yaohai Bio-Pharma aktivně hledá globální partnery, jak institucionální, tak individuální, a nabízí nejvyšší odměny v odvětví. Pokud máte jakékoliv otázky, neváhejte nás kontaktovat: BD@yaohaibio.cn