Výrobní proces eGFP mRNA

Produkce mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) zahrnuje řadu technik molekulární biologie pro vytvoření funkční molekuly RNA, která kóduje expresi eGFP. V oblasti eGFP mRNA nasbírala společnost Yaohai Bio-Pharma rozsáhlé zkušenosti s uspokojováním specifických potřeb klientů. S využitím našich zkušeností jsme syntetizovali procesní tok pro produkci EGFP mRNA.

1. Klonování genu eGFP: Slouží k získání genové sekvence kódující eGFP. Tento gen je typicky klonován z již existujícího plazmidového vektoru nebo uměle syntetizován na základě známé nukleotidové sekvence. Klonovaný gen je pak ověřen sekvenováním, aby byla zajištěna přesnost.
2. Genová optimalizace pro expresi: Pro optimální expresi v cílovém systému (např. savčích buňkách, bakteriích nebo in vitro transkripčních systémech) může gen eGFP podstoupit optimalizaci kodonů. To zahrnuje nahrazení vzácných kodonů v původní sekvenci častěji používanými v hostitelském organismu, což zvyšuje šance na účinnou translaci.
3. In vitro Příprava transkripční šablony: Jakmile je optimalizovaný gen připraven, je začleněn do vhodného vektoru, často plazmidu, který obsahuje regulační prvky nezbytné pro transkripci (např. promotorovou sekvenci). Tento plazmid slouží jako templát pro in vitro transkripci.
4. In vitro Přepis: Pomocí připraveného plazmidového templátu se provede in vitro transkripce za účelem syntézy eGFP mRNA. Tento proces zahrnuje použití RNA polymerázových enzymů, které rozpoznávají promotorovou sekvenci a iniciují transkripci, produkují komplementární vlákno RNA k templátu DNA. V závislosti na požadované aplikaci může být mRNA uzavřena, polyadenylována a/nebo modifikována pro zvýšení stability a účinnosti translace.
5. Purifikace a kontrola kvality: Syntetizovaná eGFP mRNA je poté purifikována, aby se odstranily veškeré kontaminanty, včetně DNA, proteinů a volných nukleotidů. Metody čištění mohou zahrnovat gelovou elektroforézu, sloupcovou chromatografii nebo separaci na bázi kuliček. Po purifikaci je mRNA analyzována na kvalitu, včetně koncentrace, čistoty a integrity, za použití technik, jako je UV-Vis spektrofotometrie a gelová elektroforéza.
6. Skladování a dodávka: Purifikovaná eGFP mRNA je typicky skladována při nízkých teplotách, aby byla zachována stabilita. Pro experimentální použití může být mRNA dodávána do buněk pomocí různých metod, včetně elektroporace, lipofekce nebo virových vektorů, v závislosti na specifické aplikaci a typu cílové buňky.
7. Vyjadřování a ověřování: Jakmile je eGFP mRNA uvnitř buňky, je přeložena do zesíleného zeleného fluorescenčního proteinu, který lze vizualizovat pomocí fluorescenční mikroskopie. To umožňuje ověření úspěšné produkce, dodání a exprese mRNA.

Stručně řečeno, produkce eGFP mRNA zahrnuje klonování genu, jeho optimalizaci pro expresi, přípravu in vitro transkripčního templátu, provedení transkripční reakce, purifikaci výsledné mRNA a nakonec její dodání do buněk pro expresi a ověření.

Aktivně také hledáme institucionální nebo individuální globální partnery. Nabízíme nejkonkurenceschopnější kompenzaci v oboru. Máte-li jakékoli dotazy, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]