Vyrobení procesu eGFP mRNA

Produkce mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) zahrnuje řadu technik molekulární biologie pro vytvoření funkčního RNA molekulu, který kóduje pro expresi eGFP. V oblasti mRNA eGFP má společnost Yaohai Bio-Pharma sbírala rozsáhlé zkušenosti s vyhověním specifickým potřebám klientů. S využitím našich zkušeností jsme optimalizovali proces pro produkci mRNA EGFP.

1. Klonování genu eGFP : Je třeba získat genomovou sekvenci kódující pro eGFP. Tento gen je obvykle klonován z již existující plazmidové vektorové soustavy nebo synteticky vytvořen na základě známé nukleotidové sekvence. Klonovaný gen je pak ověřen sekvenováním pro zajistění přesnosti.
2. Optimalizace genu pro expresi : Pro optimální vyjádření v cílovém systému (např. savčí buňky, bakterie nebo in vitro transkripční systémy) může být gen eGFP upraven optimalizací kodonů. Toto zahrnuje nahrazení vzácných kodonů v původním pořadí častěji používanými v hostitelském organismu, což zvyšuje pravděpodobnost efektivní translace.
3. In vitro Příprava transkripčního šablony : Jakmile je optimalizovaný gen připraven, začleňuje se do vhodného vektoru, často plazmidu, který obsahuje regulační elementy nutné pro transkripci (např. sékvence promotoru). Tento plazmid slouží jako šablona pro in vitro transkripci.
4. In vitro Transkripcе : Pomocí připravené plazmidní šablony se provádí in vitro transkripce k syntéze mRNA eGFP. Tento proces zahrnuje použití enzymů RNA polymeráz, které rozpoznávají promotorovou sekvenci a iniciovaly transkripci, produkující komplementární RNA vlákno k DNA šabloně. V závislosti na požadovaném využití může být mRNA zakončena kapem, polyadenylace a/nebo upravena pro zvýšení stability a efektivity překladu.
5. Čištění a kontrola kvality : Připravená mRNA eGFP je následně očištěna od kontaminantů, včetně DNA, bílkovin a volných nukleotidů. Metody čištění mohou zahrnovat gelovou elektroforezi, sloupcovou chromatografii nebo separaci pomocí perel. Po čištění je mRNA analyzována na kvalitu, včetně koncentrace, čistoty a integrity, pomocí technik jako UV-Vis spektrofotometrie a gelová elektroforeze.
6. Ukládání a dodávka : Očištěná mRNA eGFP se obvykle ukládá při nízkých teplotách pro udržení stability. Pro experimentální použití lze mRNA dodat do buněk různými metodami, včetně elektroporace, lipofekce nebo virálních vektorů, v závislosti na konkrétním účelu a typu cílové buňky.
7. Expresce a ověření : Jakmile je mRNA eGFP uvnitř buňky, překládá se do posilovaného zeleného fluorescenčního bílkoviny, který lze vizualizovat pomocí fluorescenční mikroskopie. To umožňuje ověřit úspěšné produkce, doručení a expresi mRNA.

Shrnutím: Produkce mRNA eGFP zahrnuje klonování genu, jeho optimalizaci pro expresi, přípravu šablony pro in vitro transkripci, provedení reakce transkripce, očištění výsledné mRNA a nakonec její dodání do buněk pro expresi a ověření.

Hledáme také aktivně globální partnery, jak institucionální, tak jednotlivce. Nabízíme nejvyšší odškodnění v odvětví. Pokud máte jakékoli otázky, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]