Mở khóa bí mật của việc chiết xuất Plasmid chất lượng cao

Chiết xuất plasmid rất quan trọng đối với các nhà nghiên cứu. Là các vectơ gen, plasmid rất quan trọng trong nghiên cứu vắc-xin và liệu pháp gen, nơi chất lượng là yếu tố quan trọng. Các yếu tố chất lượng chính bao gồm tỷ lệ siêu xoắn và hàm lượng nội độc tố. Các quy định khác nhau: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, với <5% DNA tuyến tính/vòng hở. Khách hàng thường thích siêu xoắn ≥95%. Mức độ nội độc tố là: nghiên cứu (>50 EU/µg), chuyển gen (<50 EU/µg) và không có nội độc tố (<0.1 EU/µg).

DNA Plasmid siêu xoắn

Plasmid từ Escherichia coli bao gồm DNA siêu xoắn (SC), dạng vòng hở (OC) và dạng tuyến tính (L). Tỷ lệ SC cao thúc đẩy hiệu quả chuyển gen và biểu hiện. Ví dụ, chuyển gen của plasmid SC 85.45% cao hơn 2.5 lần và biểu hiện HGF của plasmid SC 93.28% cao hơn 1.8 lần, khẳng định tính ưu việt của DNA SC.

ADN vòng hở: Khi một mạch ADN vòng kép bị đứt, cấu trúc siêu xoắn trở nên lỏng lẻo, tạo thành plasmid vòng hở có thể tích lớn hơn, di chuyển chậm nhất trong quá trình điện di và nằm ở phía trên cùng.

ADN tuyến tính: Khi cả hai sợi ADN plasmid bị đứt, cấu trúc tuyến tính được hình thành, có thể tích tương đối nhỏ hơn, di chuyển nhanh hơn ADN dạng vòng hở nhưng chậm hơn ADN dạng siêu xoắn, đứng thứ hai.

DNA siêu xoắn: Hai chuỗi xoắn đan xen, xoắn thành cấu trúc siêu xoắn dựa trên chuỗi xoắn DNA. Nó có thể tích nhỏ nhất và di chuyển nhanh nhất trong quá trình điện di, nằm ở phía dưới.

Phân tích định lượng tỷ lệ siêu xoắn

Phòng thí nghiệm sử dụng điện di gel agarose (AGE) và Gel-Pro Analyzer để đánh giá tỷ lệ siêu xoắn thông qua hình ảnh điện di. Một hình ảnh cho thấy 97.539% SC DNA, trong khi hình ảnh khác cho thấy 63.833% SC và 36.167% OC DNA (DNA tuyến tính không nhìn thấy được).

Bí mật của nội độc tố trong Plasmid

Nội độc tố là thành phần của lớp ngoài thành tế bào vi khuẩn Gram âm, được giải phóng sau khi vi khuẩn chết hoặc bị ly giải, chứa lipopolysaccharide A độc hại. Trong quá trình chiết xuất plasmid, nội độc tố xâm nhập vào dung dịch ly giải, ảnh hưởng đến hiệu quả chuyển gen và kích hoạt phản ứng miễn dịch không đặc hiệu, dẫn đến kết quả dương tính giả trong các thí nghiệm.

Phân tích định lượng và định tính nội độc tố

Xét nghiệm lysate amebocyte Limulus (LAL) phát hiện nội độc tố thông qua quá trình kết tụ với axit 2-keto-3-deoxyoctonic (KDO) trong lipopolysaccharide (LPS). Xét nghiệm này mang tính định tính và bán định lượng, cho biết sự hiện diện của nội độc tố thông qua quá trình đông tụ hoặc thay đổi màu sắc khi trộn với mẫu.

Yaohai Bio-Pharma cung cấp plasmid siêu xoắn không có nội độc tố. Gia công cho Yaohai giúp tăng hiệu quả chuyển gen và biểu hiện. Plasmid được chuyển giao có tỷ lệ SC ≥95% (trung bình 85%±10%) và mức nội độc tố ≤0.1, ≤0.01 hoặc ≤0.005 EU/μg.

Chúng tôi cũng đang tích cực tìm kiếm các đối tác toàn cầu là tổ chức hoặc cá nhân. Chúng tôi cung cấp mức bồi thường cạnh tranh nhất trong ngành. Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi: [email protected]