Sản xuất protein tái tổ hợp: Các chủng E. coli được thiết kế

Escherichia coli (E. coli) đóng vai trò quan trọng trong việc sản xuất protein tái tổ hợp trong ngành công nghiệp dược phẩm sinh học, đóng vai trò là vector biểu hiện đầu tiên để sản xuất thuốc sinh học. E. coli tự hào về khả năng phát triển nhanh, thao tác di truyền thuận tiện và tổng hợp protein tái tổ hợp nhanh chóng, cùng nhiều ưu điểm khác. Những cải tiến sâu rộng đã biến E. coli trở thành lựa chọn tối ưu để biểu hiện protein, dẫn đến việc thiết kế nhiều chủng E. coli được thiết kế khác nhau.

Yaohai Bio-Pharma chuyên cung cấp dịch vụ gia công trọn gói cho quá trình lên men, tinh chế, phát triển quy trình bào chế và sản xuất một loạt các loại dược phẩm sinh học sử dụng hệ thống biểu hiện E. coli. Về kinh nghiệm sâu rộng của Yaohai, chúng tôi tóm tắt rằng bốn chủng E. coli phổ biến được sử dụng để sản xuất protein tái tổ hợp và các đặc điểm của chúng.

Chủng BL 21

Có nguồn gốc từ dòng E. coli B, chủng BL21 thiếu protease Lon và protease màng ngoài OmpT. Protease Lon chủ yếu phân hủy protein ngoại sinh, trong khi OmpT chủ yếu phân hủy protein ma trận ngoại bào. Việc thiếu hai protease chính này có thể ngăn ngừa hiệu quả sự phân hủy protein tái tổ hợp.

Dòng Origami

Chủng Origami, một dẫn xuất của E. coli K-12, có đột biến ở thioredoxin reductase và glutathione reductase, tạo điều kiện cho sự hình thành các protein được gấp đúng cách chứa liên kết disulfide và tăng cường độ hòa tan của protein. Chủng Origami, bao gồm Origami, Origami 2 và Origami B, phù hợp để biểu hiện các protein hoạt động chứa liên kết disulfide.

Căng thẳng SHuffle

Chủng SHuffle biểu hiện liên tục isomerase liên kết disulfide DsbC trong tế bào chất, thúc đẩy sự hình thành các liên kết disulfide chính xác trong các protein bị oxy hóa. Nó cũng đóng vai trò là chaperone phân tử cho quá trình gấp protein, hỗ trợ hình thành cấu hình chính xác.

Giống Rosetta

Chủng Rosetta bổ sung E. coli với tRNA tương ứng với codon hiếm, nhằm mục đích cải thiện mức độ biểu hiện của gen ngoại sinh, đặc biệt là gen nhân chuẩn, trong các hệ thống nhân sơ. Có nguồn gốc từ BL21 và mang plasmid pRARE kháng chloramphenicol, chủng này bổ sung sáu tRNA tương ứng với codon hiếm (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC và GGA) ban đầu không có trong E. coli, cung cấp biểu hiện protein "phổ quát" hơn.

Kết luận

Ba yếu tố chính để sản xuất thành công protein tái tổ hợp là vật chủ, vectơ và điều kiện nuôi cấy. Dựa trên sự hiểu biết về các đặc tính lý hóa của protein tái tổ hợp, những ưu điểm riêng biệt của từng chủng và nhu cầu cụ thể của thí nghiệm, vật chủ phù hợp nhất nên được lựa chọn. Ngoài ra, các yếu tố như vectơ plasmid, nhiệt độ và chất cảm ứng nên được tối ưu hóa để tăng cường biểu hiện protein.

Yaohai Bio-Pharma cũng đang tích cực tìm kiếm các đối tác toàn cầu là tổ chức hoặc cá nhân và cung cấp mức lương cạnh tranh nhất trong ngành. Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, vui lòng liên hệ với chúng tôi: [email protected]