Kiểm Soát Chất Lượng Và Ứng Dụng Của Protein Tái Tổ Hợp

Kiểm soát chất lượng của protein tái tổ hợp là rất quan trọng đối với độ tin cậy và khả năng tái tạo của dữ liệu thí nghiệm. Mỗi bước, từ thiết kế dự án đến quy trình sản xuất, đều yêu cầu các chiến lược kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt.

Chiến lược Kiểm soát Chất lượng

Lĩnh vực công nghiệp tuân thủ chặt chẽ các quy trình vận hành tiêu chuẩn, trong khi cộng đồng học thuật cần tăng cường kiến thức chuyên môn để cải thiện khả năng tái tạo dữ liệu. Các protein có ứng dụng sinh học cụ thể hoặc đặc điểm sinh hóa cần có các chiến lược kiểm soát chất lượng (QC) được thiết kế riêng.

Ví dụ Khó và Giải Pháp

Yaohai Bio-Pharma có kinh nghiệm phong phú trong việc sản xuất và tinh chế protein tái tổ hợp, cùng với một đội ngũ chuyên gia, đảm bảo rằng quá trình sản xuất protein của bạn được hoàn thành với độ tinh khiết cao. Dựa trên kinh nghiệm từ hàng trăm dự án, Yaohai thân ái tóm tắt cách tối ưu hóa quá trình tinh chế protein.

Protein Kêt Hợp Với Axít Nucleic: Các bước loại bỏ axit nucleic, chẳng hạn như enzym phân giải axit nucleic hoặc kết tủa bằng PEI, là cần thiết. Tỷ lệ A260nm/A280nm được theo dõi để phát hiện sự nhiễm bẩn của axit nucleic.

Ferritin chuỗi nặng Chuột 1 cho kryo-EM: Các bước tinh chế cần được tối ưu hóa, và enzym phân giải axit nucleic cần được thêm vào để giảm tỷ lệ A260nm/A280nm và đảm bảo độ tinh khiết của protein.

Protein Chimeric Người dsRBEC: Việc phá vỡ tế bào sử dụng một đệm chứa urea, sau đó là tái gấp trên cột để thu được các protein hoạt động chức năng.

Protein Kết hợp Ion Kim Loại Hai Giá: Các ion kim loại hai giá cụ thể phải được thêm vào trong quá trình biểu hiện và tinh chế, và nên tránh các chất tạo phức.

Protein Iron-Sulfur: Imidazole nên được tránh để ngăn chặn việc phá vỡ cụm [2Fe ± 2S], đảm bảo sự gập nếp và chức năng đúng của protein.

Phần Tan của LLT1: Thiết kế đột biến tối ưu hóa quá trình hình thành liên kết disulfide và gấp protein, dẫn đến các protein ổn định và có năng suất cao.

Tinh thể kinase CLK1: Biểu hiện đồng thời với phosphatase λ loại bỏ phosphate khỏi các vị trí phosphoryl hóa, và sắc ký loại trừ kích thước (SEC) cùng sắc ký trao đổi ion âm được sử dụng để thu được CLK1 đồng nhất mà không có phosphoryl hóa không đều.

Protein dùng làm kháng nguyên: Việc đánh giá độ tinh khiết là cần thiết để tránh ô nhiễm bởi các protein có tính miễn dịch cao. Đối với kháng thể epitope cấu trúc, hình dạng ba chiều của kháng nguyên phải được duy trì.

Protein dễ tụ tập: Các chiến lược như sàng lọc các chủng khác nhau và hạ thấp nhiệt độ nuôi cấy được áp dụng để hạn chế vấn đề tụ tập, và các chiến lược tinh chế nhanh được thiết kế.

Loại bỏ endotoxin: Các phương pháp như sắc ký điện tích dương và sắc ký ái lực ligand polycation loại bỏ endotoxin, đảm bảo mức LPS dưới giới hạn ứng dụng.

Phức hợp protein: Các đơn vị phụ được biểu hiện riêng lẻ và lắp ráp in vitro hoặc đồng biểu hiện để tạo thành các phức hợp chức năng. Sự toàn vẹn của phức hợp được đánh giá bằng tính đồng nhất và khối lượng mol.

Phần kết luận

Việc sản xuất protein bắt đầu với việc thiết kế chiến lược, xem xét các đặc điểm sinh hóa và ứng dụng. Trong quá trình biểu hiện, tinh chế và kiểm soát chất lượng, các điều kiện và phương pháp được tối ưu hóa cho sự ổn định, không tụ lại và trạng thái tự nhiên. Các protein đã được tinh chế phục vụ nhiều mục đích sử dụng tiếp theo, như đặc trưng vật lý sinh học.

Yaohai Bio-Pharma cũng đang tích cực tìm kiếm đối tác toàn cầu là tổ chức hoặc cá nhân và cung cấp mức bồi thường cạnh tranh nhất trong ngành. Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi: BD@yaohaibio.cn