Kiểm soát chất lượng và ứng dụng của protein tái tổ hợp

Kiểm soát chất lượng protein tái tổ hợp là rất quan trọng đối với độ tin cậy và khả năng tái tạo của dữ liệu thực nghiệm. Mỗi bước, từ thiết kế dự án đến quy trình sản xuất, đều đòi hỏi các chiến lược kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt.

Chiến lược kiểm soát chất lượng

Ngành công nghiệp tuân thủ các quy trình vận hành tiêu chuẩn nghiêm ngặt, trong khi cộng đồng học thuật cần nâng cao kiến ​​thức chuyên môn để cải thiện khả năng tái tạo dữ liệu. Các protein có ứng dụng sinh học hoặc đặc điểm sinh hóa cụ thể đòi hỏi các chiến lược kiểm soát chất lượng (QC) phù hợp.

Các ví dụ và giải pháp đầy thách thức

Yaohai Bio-Pharma tự hào có kinh nghiệm sâu rộng trong sản xuất và tinh chế protein tái tổ hợp, cùng với đội ngũ chuyên gia, đảm bảo rằng sản xuất protein của bạn được hoàn thành với độ tinh khiết cao. Tận dụng kinh nghiệm của chúng tôi từ hàng trăm dự án, Yaohai vui lòng tóm tắt cách tối ưu hóa quá trình tinh chế protein.

Protein liên kết axit nucleic: Các bước loại bỏ axit nucleic, chẳng hạn như nuclease hoặc kết tủa PEI, là cần thiết. Tỷ lệ A260nm/A280nm được theo dõi để phát hiện nhiễm bẩn axit nucleic.

Chuột Ferritin Heavy Chain 1 cho cryo-EM: Các bước tinh chế cần được tối ưu hóa và cần bổ sung nuclease để giảm tỷ lệ A260nm/A280nm và đảm bảo độ tinh khiết của protein.

Protein Chimeric dsRBEC của con người: Phương pháp ly giải tế bào sử dụng dung dịch đệm chứa urê, sau đó gấp lại trên cột để thu được protein có hoạt tính chức năng.

Protein liên kết với cation hóa trị hai: Các cation hóa trị hai cụ thể phải được thêm vào trong quá trình biểu hiện và tinh chế, và nên tránh các tác nhân tạo phức.

Protein sắt-lưu huỳnh: Nên tránh sử dụng imidazole để ngăn ngừa sự phá vỡ cụm [2Fe ± 2S], đảm bảo protein gấp và hoạt động chính xác.

Mảnh hòa tan của LLT1: Thiết kế đột biến tối ưu hóa sự hình thành liên kết disulfide và quá trình gấp protein, tạo ra protein ổn định và năng suất cao.

Kết tinh Kinase CLK1: Sự đồng biểu hiện với λ-phosphatase loại bỏ các phosphat khỏi các vị trí phosphoryl hóa và sắc ký loại trừ kích thước (SEC) và sắc ký trao đổi anion được sử dụng để thu được CLK1 đồng nhất mà không có sự phosphoryl hóa không đồng nhất.

Protein sử dụng kháng nguyên: Đánh giá độ tinh khiết là cần thiết để tránh nhiễm bẩn với các protein có khả năng sinh miễn dịch cao. Đối với kháng thể epitope cấu trúc, cấu hình ba chiều của kháng nguyên phải được duy trì.

Protein dễ kết tụ: Các chiến lược như sàng lọc các chủng khác nhau và hạ thấp nhiệt độ nuôi cấy được sử dụng để hạn chế các vấn đề về kết tụ và thiết kế các chiến lược tinh chế nhanh chóng.

Loại bỏ nội độc tố: Các phương pháp như sắc ký điện tích dương và sắc ký ái lực phối tử polycation loại bỏ nội độc tố, đảm bảo mức LPS thấp hơn giới hạn ứng dụng.

Phức hợp protein: Các tiểu đơn vị được biểu hiện riêng biệt và lắp ráp trong ống nghiệm hoặc được biểu hiện đồng thời để tạo thành phức hợp chức năng. Tính toàn vẹn của phức hợp được đánh giá bằng tính đồng nhất và khối lượng mol.

Kết luận

Sản xuất protein bắt đầu bằng thiết kế chiến lược, xem xét các đặc điểm và ứng dụng sinh hóa. Trong quá trình biểu hiện, tinh chế và QC, các điều kiện và phương pháp được tối ưu hóa để đạt được độ ổn định, không kết tụ và trạng thái tự nhiên. Protein tinh chế phục vụ nhiều mục đích sử dụng hạ nguồn khác nhau, như đặc điểm sinh lý.

Yaohai Bio-Pharma cũng đang tích cực tìm kiếm các đối tác toàn cầu là tổ chức hoặc cá nhân và cung cấp mức lương cạnh tranh nhất trong ngành. Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, vui lòng liên hệ với chúng tôi: [email protected]