Tối ưu hóa quá trình tinh chế insulin tái tổ hợp của con người

Trong những năm gần đây, sự gia tăng của bệnh nhân tiểu đường đã thúc đẩy nhu cầu insulin, nhưng insulin giá cả phải chăng lại đang khan hiếm. Sản xuất insulin hiệu quả, tiết kiệm là rất quan trọng. Chủ yếu được sản xuất thông qua Escherichia coli (E. coli) và nấm men do tăng trưởng nhanh và chi phí thấp, E. coli phải đối mặt với quá trình xử lý hạ nguồn phức tạp.

Tổng quan về xử lý hạ nguồn:

Quá trình tinh chế insulin người tái tổ hợp từ các thể vùi E. coli bao gồm nhiều bước, bao gồm thu hồi, rửa, hòa tan và oxy hóa, cắt, trao đổi đệm, tinh chế sắc ký, kết tủa, tái tạo, cắt bằng enzym và bào chế.

Yaohai Bio-Pharma tự hào có kinh nghiệm sâu rộng trong sản xuất và tinh chế insulin tái tổ hợp, cùng với đội ngũ chuyên gia, đảm bảo rằng quá trình sản xuất insulin của bạn được hoàn thành với hiệu quả cao. Tận dụng kinh nghiệm của chúng tôi từ hàng trăm dự án, Yaohai vui lòng tóm tắt cách tối ưu hóa Quy trình tinh chế hạ lưu cho Insulin người tái tổ hợp.

Phục hồi và rửa cơ thể bao gồm:

Các tế bào bị phá vỡ bằng các phương pháp cơ học (như siêu âm, đồng nhất hóa áp suất cao) hoặc xử lý lysozyme, sau đó rửa bằng dung dịch đệm (có chứa urê, Triton X-100, v.v.) để loại bỏ tạp chất. Trong quá trình rửa, các thông số cần được tối ưu hóa để đảm bảo chất lượng protein trong khi kiểm soát chi phí.

Sự hòa tan và oxy hóa của thể vùi:

Các chất biến tính có nồng độ cao (như guanidine hydrochloride và urê) được sử dụng để hòa tan các thể vùi, với dithiothreitol hoặc β-mercaptoethanol được thêm vào để ngăn ngừa sự hình thành các liên kết disulfide không chính xác. Độ pH và nhiệt độ ảnh hưởng đáng kể đến phản ứng hòa tan và oxy hóa.

Sự phân cắt và trao đổi đệm:

Sự phân cắt xyanogen bromide được sử dụng để loại bỏ axit amin khởi đầu N-terminal, nhưng nó gây ra các vấn đề về độc tính và độ đặc hiệu thấp. Thông qua thẩm phân, siêu lọc hoặc sắc ký loại trừ kích thước, trao đổi đệm loại bỏ các thuốc thử có hại để chuẩn bị cho các hoạt động tiếp theo.

Làm sạch và kết tủa sắc ký:

Nhiều kỹ thuật sắc ký được sử dụng để tinh chế insulin, bao gồm sắc ký ái lực, sắc ký trao đổi ion, sắc ký pha đảo ngược, sắc ký tương tác kỵ nước và sắc ký loại trừ kích thước. Các phương pháp kết tủa, chẳng hạn như kết tủa pH và kết tinh kẽm, được sử dụng để loại bỏ tạp chất và cô đặc protein.

Sự tái tạo:

Protein hòa tan được pha loãng trong dung dịch đệm tái bão hòa để thúc đẩy sự hình thành đúng đắn các liên kết disulfide và quá trình gấp protein. Sắc ký lỏng gấp protein và thẩm phân cũng là các phương pháp được sử dụng để tái bão hòa.

Sự phân cắt và công thức của Enzym:

Trypsin và carboxypeptidase B được sử dụng để cắt peptide C, tạo thành heterodimer insulin hoạt động. Cuối cùng, kết tinh và đông khô được sử dụng để loại bỏ muối và chất đệm còn sót lại, chuẩn bị một công thức ổn định. Các chất phụ gia cụ thể (như kẽm và protamine) được thêm vào để đáp ứng các nhu cầu lâm sàng khác nhau.

Kết luận:

Xử lý hạ lưu của insulin từ E. coli phức tạp. Trọng tâm trong tương lai nên là tối ưu hóa các bước này để sản xuất hiệu quả, tiết kiệm nhằm đáp ứng nhu cầu và giảm chi phí.

Yaohai Bio-Pharma cũng đang tích cực tìm kiếm các đối tác toàn cầu là tổ chức hoặc cá nhân và cung cấp mức lương cạnh tranh nhất trong ngành. Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, vui lòng liên hệ với chúng tôi: [email protected]