Quy trình sản xuất mRNA eGFP

Việc sản xuất mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) liên quan đến một loạt các kỹ thuật sinh học phân tử để tạo ra một phân tử RNA chức năng mã hóa cho biểu hiện của eGFP. Trong lĩnh vực mRNA eGFP, Yaohai Bio-Pharma đã tích lũy được nhiều kinh nghiệm trong việc đáp ứng các nhu cầu cụ thể của khách hàng. Tận dụng kinh nghiệm của mình, chúng tôi đã tổng hợp quy trình sản xuất mRNA EGFP.

1. Nhân bản gen eGFP: Để có được trình tự gen mã hóa cho eGFP. Gen này thường được nhân bản từ một vectơ plasmid có sẵn hoặc được tổng hợp nhân tạo dựa trên trình tự nucleotide đã biết. Sau đó, gen được nhân bản được xác minh thông qua giải trình tự để đảm bảo độ chính xác.
2. Tối ưu hóa gen để biểu hiện:Để biểu hiện tối ưu trong hệ thống mục tiêu (ví dụ, tế bào động vật có vú, vi khuẩn hoặc hệ thống phiên mã trong ống nghiệm), gen eGFP có thể trải qua quá trình tối ưu hóa codon. Điều này bao gồm việc thay thế các codon hiếm trong trình tự ban đầu bằng các codon được sử dụng thường xuyên hơn trong sinh vật chủ, tăng khả năng dịch mã hiệu quả.
3. Trong ống nghiệm Chuẩn bị mẫu phiên âm: Khi gen được tối ưu hóa đã sẵn sàng, nó được đưa vào một vectơ thích hợp, thường là một plasmid, chứa các yếu tố điều hòa cần thiết cho phiên mã (ví dụ, trình tự khởi động). Plasmid này đóng vai trò là khuôn mẫu cho phiên mã trong ống nghiệm.
4. Trong ống nghiệm Phiên mã: Sử dụng khuôn mẫu plasmid đã chuẩn bị, phiên mã trong ống nghiệm được thực hiện để tổng hợp mRNA eGFP. Quá trình này bao gồm việc sử dụng các enzyme RNA polymerase, nhận biết trình tự khởi động và bắt đầu phiên mã, tạo ra một sợi RNA bổ sung cho khuôn mẫu DNA. Tùy thuộc vào ứng dụng mong muốn, mRNA có thể được phủ mũ, polyadenylat hóa và/hoặc sửa đổi để tăng cường tính ổn định và hiệu quả dịch mã.
5. Thanh lọc và kiểm soát chất lượng: mRNA eGFP tổng hợp sau đó được tinh chế để loại bỏ mọi chất gây ô nhiễm, bao gồm DNA, protein và nucleotide tự do. Các phương pháp tinh chế có thể bao gồm điện di gel, sắc ký cột hoặc tách dựa trên hạt. Sau khi tinh chế, mRNA được phân tích về chất lượng, bao gồm nồng độ, độ tinh khiết và tính toàn vẹn, bằng các kỹ thuật như quang phổ UV-Vis và điện di gel.
6. Lưu trữ và giao hàng: mRNA eGFP tinh khiết thường được bảo quản ở nhiệt độ thấp để duy trì độ ổn định. Đối với mục đích sử dụng thử nghiệm, mRNA có thể được đưa vào tế bào bằng nhiều phương pháp khác nhau, bao gồm điện di, lipofection hoặc vectơ virus, tùy thuộc vào ứng dụng cụ thể và loại tế bào đích.
7. Biểu hiện và xác minh: Khi đã vào bên trong tế bào, mRNA eGFP được dịch thành protein huỳnh quang xanh tăng cường, có thể quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang. Điều này cho phép xác minh quá trình sản xuất, phân phối và biểu hiện mRNA thành công.

Tóm lại, quá trình sản xuất mRNA eGFP bao gồm việc nhân bản gen, tối ưu hóa gen để biểu hiện, chuẩn bị khuôn mẫu phiên mã trong ống nghiệm, thực hiện phản ứng phiên mã, tinh chế mRNA thu được và cuối cùng đưa vào tế bào để biểu hiện và xác minh.

Chúng tôi cũng đang tích cực tìm kiếm các đối tác toàn cầu là tổ chức hoặc cá nhân. Chúng tôi cung cấp mức bồi thường cạnh tranh nhất trong ngành. Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi: [email protected]