Quy Trình Sản Xuất mRNA eGFP

Việc sản xuất mRNA của eGFP (Protein Phát Quang Xanh Cường Độ Cao) bao gồm một loạt kỹ thuật sinh học phân tử để tạo ra phân tử RNA chức năng mã hóa cho sự biểu hiện của eGFP. Trong lĩnh vực mRNA eGFP, Yaohai Bio-Pharma đã tích lũy được nhiều kinh nghiệm trong việc đáp ứng các nhu cầu cụ thể của khách hàng. Dựa trên kinh nghiệm của mình, chúng tôi đã tổng hợp quy trình sản xuất mRNA EGFP.

1. Cloning Gen eGFP : Để lấy được chuỗi gen mã hóa cho eGFP. Gen này thường được nhân bản từ một vector plasmid sẵn có hoặc tổng hợp nhân tạo dựa trên chuỗi nucleotide đã biết. Gen đã nhân bản sau đó được xác nhận thông qua quá trình giải trình tự để đảm bảo độ chính xác.
2. Tối Ưu Hóa Gen Cho Biểu Hiện : Để có biểu hiện tối ưu trong hệ thống đích (ví dụ, tế bào động vật, vi khuẩn hoặc hệ thống phiên mã in vitro), gen eGFP có thể được tối ưu hóa mật mã. Điều này bao gồm việc thay thế các mật mã hiếm trong chuỗi gốc bằng những mật mã được sử dụng thường xuyên hơn ở sinh vật chủ, tăng khả năng phiên dịch hiệu quả.
3. Trong thể nghiệm Chuẩn bị Mẫu Phiên Mã : Khi gen đã được tối ưu sẵn sàng, nó sẽ được tích hợp vào một vector thích hợp, thường là plasmid, chứa các yếu tố điều tiết cần thiết cho quá trình phiên mã (ví dụ, chuỗi promoter). Plasmid này phục vụ như một mẫu cho phiên mã in vitro.
4. Trong thể nghiệm Phiên Mã : Sử dụng plasmid đã chuẩn bị, quá trình chuyển lục in vitro được thực hiện để tổng hợp mRNA eGFP. Quá trình này sử dụng các enzym polymerase RNA, nhận diện chuỗi promoter và khởi động quá trình chuyển lục, tạo ra một chuỗi RNA bổ sung cho mẫu DNA. Tùy thuộc vào ứng dụng mong muốn, mRNA có thể được gắn nắp, polyadenylated và/hoặc sửa đổi để tăng cường độ ổn định và hiệu suất dịch mã.
5. Làm sạch và Kiểm soát Chất lượng : mRNA eGFP đã tổng hợp sau đó được làm sạch để loại bỏ mọi tạp chất, bao gồm DNA, protein và nucleotide tự do. Các phương pháp làm sạch có thể bao gồm điện di trên gel, sắc ký cột hoặc tách biệt dựa trên hạt珠. Sau khi làm sạch, mRNA được phân tích về chất lượng, bao gồm nồng độ, độ tinh khiết và tính toàn vẹn, bằng các kỹ thuật như quang phổ UV-Vis và điện di trên gel.
6. Lưu trữ và Giao hàng : mRNA eGFP đã được tinh chế thường được bảo quản ở nhiệt độ thấp để duy trì sự ổn định. Để sử dụng trong thí nghiệm, mRNA có thể được chuyển vào tế bào bằng nhiều phương pháp khác nhau, bao gồm electroporation (điện thấm), lipofection (chuyển gen bằng lipid), hoặc vector virus, tùy thuộc vào ứng dụng cụ thể và loại tế bào mục tiêu.
7. Biểu hiện và Xác minh : Sau khi vào bên trong tế bào, mRNA eGFP được dịch thành protein phát sáng xanh lá cải tiến, có thể được quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang. Điều này cho phép xác minh việc sản xuất mRNA, chuyển gen và biểu hiện mRNA thành công.

Tóm lại, quá trình sản xuất mRNA eGFP bao gồm việc克隆 gen, tối ưu hóa nó cho quá trình biểu hiện, chuẩn bị mẫu bản sao cho phiên mã in vitro, thực hiện phản ứng phiên mã, tinh chế mRNA thu được, và cuối cùng chuyển nó vào tế bào để biểu hiện và xác minh.

Chúng tôi cũng đang tích cực tìm kiếm đối tác toàn cầu là tổ chức hoặc cá nhân. Chúng tôi cung cấp mức bồi thường cạnh tranh nhất trong ngành. Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi: [email protected]