Розкриття оптимальної дози репортерної РНК eGFP

У молекулярній біології та біотехнології покращений зелений флуоресцентний білок (eGFP) став ключовим репортерним геном завдяки його здатності виробляти яскраво-зелену флуоресценцію при 509 нм. Цей білок, спочатку виділений з медузи Aequorea victoria, є маркером прямого виявлення в клітинних культурах ссавців, що полегшує моніторинг і оптимізацію ефективності трансфекції. Однак виникає питання: яка оптимальна доза репортерної РНК eGFP для досягнення бажаних рівнів експресії?

Дослідження показали, що ефективність репортерної РНК eGFP значною мірою залежить від її дозування, особливо в контексті систем кільцевої РНК (circRNA) і самоампліфікуючої мРНК (saRNA). Дослідження, проведені командою Katrien Remaut з дослідницької групи наномедицини Університету Гента, підкреслили складний зв’язок між дозуванням saRNA та ефективністю її трансляції в клітинах сітківки. Вони виявили, що низькі дози saRNA, нижчі від порогу вродженої імунної активації, сприяють ефективній експресії білка. Це підкреслює важливість точного контролю дозування для використання повного потенціалу репортерної РНК eGFP.

У практичних застосуваннях зазвичай використовувані концентрації мРНК eGFP можуть коливатися від мікрограмів (мкг) до нанограмів на мікролітр (нг/мкл). Наприклад, в експериментах з трансфекції було показано, що дози в діапазоні від 0.05 мкг до 0.5 мкг мРНК eGFP дають значні рівні експресії в різних типах клітин, причому в деяких випадках відсоток позитивних клітин досягає 99-100%. Примітно, що при дозах нижче 0.1 мкг saRNA демонструє вищі рівні експресії порівняно з лінійною мРНК, демонструючи її перевагу в самопосиленні.

Універсальність репортерної РНК eGFP полягає не тільки в її яскравій і стабільній флуоресценції, але й у її адаптованості до різних експериментальних установок. Дослідники можуть точно налаштувати дозування відповідно до своїх конкретних потреб, забезпечуючи точний контроль над рівнями експресії генів. Ця функція робить eGFP безцінним інструментом для вивчення функції генів, моніторингу долі клітин і оптимізації протоколів трансфекції.

Підсумовуючи, оптимальне дозування репортерної РНК eGFP сильно залежить від експериментального контексту та бажаних результатів. Ретельно підбираючи відповідну дозу, дослідники можуть використовувати весь потенціал цього універсального репортерного гена, покращуючи наше розуміння молекулярних механізмів і стимулюючи інновації в біотехнології.

Yaohai Bio-Pharma — це перший і найбільший біопрепарат, присвячений системі мікробної експресії CRDMO у Великому Китаї. Ми прагнемо задовольнити клінічні та комерційні потреби наших клієнтів у всьому світі щодо біологічних ліків, вакцин і засобів діагностики для людей і ветеринарії.

Ми також активно шукаємо інституційних або індивідуальних глобальних партнерів. Ми пропонуємо найконкурентнішу компенсацію в галузі. Якщо у вас виникли запитання, зв’яжіться з нами: [email protected]