Процес виробництва мРНК eGFP

Виробництво мРНК eGFP (підсиленого зеленого флуоресцентного білка) передбачає низку методів молекулярної біології для створення функціональної молекули РНК, яка кодує експресію eGFP. У сфері мРНК eGFP компанія Yaohai Bio-Pharma накопичила великий досвід у задоволенні конкретних потреб клієнтів. Використовуючи наш досвід, ми синтезували процес отримання мРНК EGFP.

1. Клонування гена eGFP: Це для отримання послідовності гена, що кодує eGFP. Цей ген зазвичай клонують з уже існуючого плазмідного вектора або синтезують штучно на основі відомої послідовності нуклеотидів. Потім клонований ген перевіряється за допомогою секвенування, щоб забезпечити точність.
2. Оптимізація генів для експресії: Для оптимальної експресії в цільовій системі (наприклад, клітинах ссавців, бактеріях або системах транскрипції in vitro) ген eGFP може піддаватися оптимізації кодонів. Це передбачає заміну рідкісних кодонів у вихідній послідовності на більш часто використовувані в організмі господаря, збільшуючи шанси на ефективну трансляцію.
3. В пробірці Підготовка шаблону транскрипції: Коли оптимізований ген готовий, його вбудовують у відповідний вектор, часто плазміду, що містить регуляторні елементи, необхідні для транскрипції (наприклад, послідовність промотора). Ця плазміда служить шаблоном для транскрипції in vitro.
4. В пробірці Transcription: Використовуючи підготовлену плазмідну матрицю, виконується транскрипція in vitro для синтезу мРНК eGFP. Цей процес передбачає використання ферментів РНК-полімерази, які розпізнають послідовність промотора та ініціюють транскрипцію, утворюючи комплементарний ланцюг РНК до матриці ДНК. Залежно від бажаного застосування мРНК може бути кепована, поліаденільована та/або модифікована для підвищення стабільності та ефективності трансляції.
5. Очищення та контроль якості: Потім синтезовану мРНК eGFP очищають для видалення будь-яких забруднень, включаючи ДНК, білки та вільні нуклеотиди. Методи очищення можуть включати гель-електрофорез, колонкову хроматографію або розділення на основі кульок. Після очищення мРНК аналізують на якість, включаючи концентрацію, чистоту та цілісність, використовуючи такі методи, як УФ-видима спектрофотометрія та гель-електрофорез.
6. Зберігання та доставка: Очищену мРНК eGFP зазвичай зберігають при низьких температурах для підтримки стабільності. Для експериментального використання мРНК можна доставити в клітини за допомогою різних методів, включаючи електропорацію, ліпофекцію або вірусні вектори, залежно від конкретного застосування та типу клітини-мішені.
7. Вираз і перевірка: потрапивши всередину клітини, мРНК eGFP транслюється в посилений зелений флуоресцентний білок, який можна візуалізувати за допомогою флуоресцентної мікроскопії. Це дозволяє перевірити успішне виробництво, доставку та експресію мРНК.

Підсумовуючи, виробництво мРНК eGFP включає клонування гена, оптимізацію його для експресії, підготовку шаблону транскрипції in vitro, виконання реакції транскрипції, очищення отриманої мРНК і, нарешті, доставку її в клітини для експресії та перевірки.

Ми також активно шукаємо інституційних або індивідуальних глобальних партнерів. Ми пропонуємо найконкурентнішу компенсацію в галузі. Якщо у вас виникли запитання, зв’яжіться з нами: [email protected]