Технологічний процес виготовлення мРНК eGFP

Виробництво mRNA eGFP (Покращений Зелений Флуоресцентний Протеїн) включає серію молекулярно-біологічних технік для генерації функціональної молекули РНК, яка кодує вираз протеїну eGFP. У сфері mRNA eGFP компанія Yaohai Bio-Pharma накопичила розширений досвід у задовolenнi специфiчних потреб клієнтів. Використовуючи наш досвід, ми оптимізували процес виробництва mRNA EGFP.

1. Клонування гена eGFP : Щоб отримати генетичний рядок, що кодує eGFP. Цей ген зазвичай клонується з існуючого плазмідного вектора або синтезується штучно на основі відомої нуклеотидної послідовності. Клонований ген потім перевіряється за допомогою секвенування для забезпечення точності.
2. Оптимізація гена для експресії : Для оптимального вираження в цільовій системі (наприклад, у мамилярних клітинах, бактеріях або системах транскрипції in vitro) ген eGFP може піддаватися оптимізації кодонів. Це включає заміну рідкісних кодонів у початковій послідовності на частіше використовувані у господарському організмі, збільшуючи шанси ефективного перекладу.
3. У vitro Підготовка шаблону транскрипції : Коли оптимізований ген готовий, його вбудовують у відповідний вектор, зазвичай плазмід, який містить регулюючі елементи, необхідні для транскрипції (наприклад, промоторну послідовність). Цей плазмід виступає як шаблон для транскрипції in vitro.
4. У vitro Транскрипція : За допомогою підготовленого плазмідного шаблону, виконується транскрипція in vitro для синтезу мРНК eGFP. Цей процес включає використання ензимів РНК-полімераз, які розпізнають промоторну послідовність і запускають транскрипцію, виробляючи комплементарний РНК-ланцюг до ДНК-шаблону. В залежності від бажаної застосування, мРНК може бути каптована, поліаденілована і/або модифікована для покращення стійкості та ефективності трансляції.
5. Очищення та контроль якості : Синтезована мРНК eGFP потім очищується від будь-яких забруднювачів, включаючи ДНК, протеїни та вільні нуклеотиди. Методи очищення можуть включати гелеву електрофорезу, колонкову хроматографію або сепарацію на основі бічок. Після очищення мРНК аналізується на якість, включаючи концентрацію, чистоту та цілісність, за допомогою технік, таких як УФ-Віс спектрофотометрія та гелевий електрофорез.
6. Зберігання та доставка : Очищена mRNA eGFP звичайно зберігається при низьких температурах для збереження стабільності. Для експериментального використання mRNA можна доставляти до клітин різними методами, включаючи електропорацію, ліпофекцію або вірусні вектори, залежно від конкретного застосування та типу цільової клітини.
7. Експресія та підтвердження : Після потрапляння у клітину, mRNA eGFP перекладається у збільшений зелений флуоресцентний протеїн, який можна спостерігати за допомогою флуоресцентної мікроскопії. Це дозволяє підтвердити успішне виробництво, доставку та експресію mRNA.

У підсумку, виробництво mRNA eGFP включає клонування гену, оптимізацію його для експресії, підготовку шаблону для транскрипції in vitro, виконання реакції транскрипції, очищення отриманої mRNA та, нарешті, її доставку до клітин для експресії та підтвердження.

Ми також активно шукаємо глобальних партнерів серед установ або окремих осіб. Ми пропонуємо найбільш конкурентоспроможну компенсацію в галузі. Якщо в вас є будь-які питання, будь ласка, не соромтеся звертатися до нас: [email protected]