Контроль якості та застосування рекомбінантних білків

Контроль якості рекомбінантних білків є критичним для надійності та відтворюваності експериментальних даних. Кожен етап, від проектного дизайну до процесу виробництва, вимагає строгих стратегій контролю якості.

Стратегії контролю якості

Промисловий сектор притримується строгих стандартних операційних процедури, тоді як наукова спільнота має покращувати професійні знання для підвищення відтворюваності даних. Білки з певними біологічними застосуваннями або біохімічними характеристиками вимагають спеціалізованих стратегій контролю якості (QC).

Викликаючі приклади та рішення

Yaohai Bio-Pharma має широкий досвід у виробництві та очищенні рекомбінантних білків, а також команду експертів, що гарантує високу чистоту вашого виробництва білків. Використовуючи наш досвід сотень проектів, Yaohai щедро підсумовує, як оптимізувати очищення білків.

Білки, що зв'язуються з нуклеїчними кислотами: Кроки видалення нуклеїнових кислот, такі як нуклеази або осадження PEI, необхідні. Відношення A260nm/A280nm вимірюється для виявлення забруднення нуклеїновими кислотами.

Феритин тяжолого ланцюга миші для крио-ЕМ: Необхідно оптимізувати етапи очищення та додавати нуклеази для зниження відношення A260nm/A280nm та забезпечення чистоти білка.

Химерний білок Людина dsRBEC: Лізис клітин виконується за допомогою буфера, що містить урею, після чого проводиться рефолдування на колонці для отримання функціонально активних білків.

Білки, що зв'язують дивалентні катіони: Під час експресії та очищення необхідно додавати специфічні дивалентні катіони та уникати хелатуючих агентів.

Жалозосульфурні білки: Необхідно уникати імідазолу, щоб не зруйнувати [2Fe ± 2S] кластер, що забезпечує правильне складання та функціонування білка.

Розчинний фрагмент LLT1: Мутантний дизайн оптимізує формування дисульфідних зв'язків та складання білка, що призводить до стабільних і високодохідних білків.

Кристалізація кінази CLK1: Когешність з λ-фосфатазою видаляє фосфати з фосфорилованих сайтів, а хроматографія розмірного виключення (SEC) та іонна-обмінна хроматографія використовуються для отримання однорідної CLK1 без неоднорідної фосфорилації.

Білки для використання як антигени: Оцінка чистоти необхідна для уникнення забруднення сильно імуногенними білками. Для структурних епітопних антитіл повинна зберігатися тривимірна конформація антигена.

Білки, схильні до агрегації: Використовуються стратегії, такі як екранування різних штамів та зниження температури вирощування, щоб обмежити проблеми агрегації, а також розробляються швидкі методи очищення.

Видалення ендотоксинів: Методи, такі як позитивно заряджена хроматографія та афінна хроматографія полікатіонних лигандів, видаляють ендотоксини, забезпечуючи рівень ЛПС нижче меж застосування.

Комплекси білків: Підодиниці виражаються окремо і збираються in vitro або спільно виражаються для утворення функціональних комплексів. Цілісність комплексу оцінюється за допомогою однорідності та молярної маси.

Висновок

Виробництво білків починається з стратегічного проектування, враховуючи біохімічні характеристики та застосування. Під час вираження, очищення та КБ, умови та методи оптимізуються для стабільності, незагромадження та природнього стану. Очищені білки використовуються для різноманітних наступних дій, таких як біофізична характеристика.

Yaohai Bio-Pharma також активно шукає глобальних партнерів — інституцій або осіб — і пропонує найбільш конкурентоспроможну компенсацію в галузі. Якщо у вас є будь-які питання, будь ласка, не соромтеся звертатися до нас: [email protected]