Контроль якості та застосування рекомбінантних білків

Контроль якості рекомбінантних білків має вирішальне значення для надійності та відтворюваності експериментальних даних. Кожен крок, від розробки проекту до виробничого процесу, вимагає суворих стратегій контролю якості.

Стратегії контролю якості

Промисловий сектор дотримується суворих стандартних операційних процедур, тоді як академічне співтовариство потребує вдосконалення професійних знань для покращення відтворюваності даних. Білки зі спеціальним біологічним застосуванням або біохімічними характеристиками вимагають індивідуальних стратегій контролю якості (QC).

Складні приклади та рішення

Yaohai Bio-Pharma може похвалитися великим досвідом у виробництві та очищенні рекомбінантних білків у поєднанні з командою експертів, що гарантує, що ваше виробництво білка буде завершено з високою чистотою. Використовуючи наш досвід сотень проектів, Yaohai люб’язно підсумовує, як оптимізувати очищення білка.

Білки, що зв'язують нуклеїнові кислоти: Необхідні етапи видалення нуклеїнової кислоти, такі як нуклеази або преципітація PEI. Співвідношення A260nm/A280nm контролюється для виявлення контамінації нуклеїнової кислоти.

Важкий ланцюг феритину миші 1 для кріо-ЕМ: Необхідно оптимізувати етапи очищення та додати нуклеази, щоб зменшити співвідношення A260nm/A280nm і забезпечити чистоту білка.

Химерний білок людини dsRBEC: Для лізису клітин використовується буфер, що містить сечовину, з подальшим рефолдингом на колонці для отримання функціонально активних білків.

Білки, що зв'язують двовалентні катіони: Специфічні двовалентні катіони повинні бути додані під час експресії та очищення, і слід уникати хелатуючих агентів.

Залізо-сірчані білки: Слід уникати імідазолу, щоб запобігти руйнуванню кластера [2Fe ± 2S], забезпечуючи правильне згортання та функціонування білка.

Розчинний фрагмент LLT1: Мутантний дизайн оптимізує утворення дисульфідних зв’язків і згортання білків, що призводить до отримання стабільних білків з високим виходом.

Кристалізація кінази CLK1: Спільна експресія з λ-фосфатазою видаляє фосфати з сайтів фосфорилювання, а ексклюзійна хроматографія (SEC) та аніонообмінна хроматографія використовуються для отримання гомогенного CLK1 без гетерогенного фосфорилювання.

Білки для використання антигенів: Оцінка чистоти необхідна для уникнення контамінації високоімуногенними білками. Для структурних епітопних антитіл необхідно підтримувати тривимірну конформацію антигену.

Схильні до агрегації білки: Для обмеження проблем агрегації використовуються такі стратегії, як скринінг різних штамів і зниження температури культивування, а також розроблені стратегії швидкого очищення.

Видалення ендотоксину: Такі методи, як хроматографія позитивного заряду та афінна хроматографія полікатіонного ліганду, видаляють ендотоксини, забезпечуючи рівень LPS нижче допустимих меж.

Протеїнові комплекси: Субодиниці експресуються окремо та збираються in vitro або коекспресуються для утворення функціональних комплексів. Цілісність комплексу оцінюють за однорідністю і молярною масою.

Висновок

Виробництво білка починається зі стратегічного планування, враховуючи біохімічні характеристики та застосування. Під час експресії, очищення та контролю якості умови та методи оптимізовані для стабільності, відсутності агрегації та природного стану. Очищені білки служать для різноманітних подальших цілей, наприклад для біофізичних характеристик.

Yaohai Bio-Pharma також активно шукає інституційних або індивідуальних глобальних партнерів і пропонує найконкурентнішу компенсацію в галузі. Якщо у вас виникли запитання, зв’яжіться з нами: [email protected]