Оптимізація процесу очищення рекомбінантного людського інсуліну

У останні роки зростання кількості пацієнтів з діабетом сприяло підвищенню попиту на інсулін, але доступний інсулін у короткості. Ефективне та економічне виробництво інсуліну є ключовим. В основному виробляється за допомогою Escherichia coli (E. coli) та дріжджів через швидкий рост та низьку вартість, E. coli стикається з складними процесами післяпроцесної обробки.

Огляд післяпроцесної обробки:

Очищення рекомбінантного людського інсуліну від інклужних тіл E. coli включає багато етапів, включаючи відновлення, мивку, солюбілізацію та окислення, розщеплення, заміну буферу, хроматографічне очищення, випадіння, ренатурацію, ензиматичне розщеплення та формулювання.

Yaohai Bio-Pharma має широкий досвід у виробництві та очищенні рекомбінантного інсуліну, а також команду експертів, що забезпечує високу ефективність вашого виробництва інсуліну. За допомогою нашого досвіду з сотень проектів, Yaohai щедро підсумовує, як оптимізувати Процес Післяочистки для Рекомбінантного Людського Інсуліну.

Відновлення та прання тіл включення:

Клітини розрушаються за допомогою механічних методів (наприклад, ультразвукової обробки, високотискової гомогенізації) або обробки лізозимом, після чого використовуються пранні буфери (що містять урею, Triton X-100 тощо) для видалення забруднень. Під час прання необхідно оптимізувати параметри, щоб забезпечити якість белка при одночасному контролі витрат.

Розчинення тіл включення та оксидування:

Для розчинення тіл включення використовуються висококонцентровані денатуратори (наприклад, гуанід хлорид і урея), до яких додаються дитиотретол або β-меркаптоетанол для запобігання утворення неправильних двосерникових зв'язків. pH та температура значно впливають на реакції розчинення та оксидування.

Розщеплення та заміна буферу:

Розщеплення цианогеном бромідом використовується для видалення N-термінальної початкової амінокислоти, але воно має проблеми токсичності та низької специфічності. За допомогою діалізації, ультрафільтрації або хроматографії розподілу за розмірами, обмін буферу видаляє шкідливі реагенти, підготовлюючи до наступних операцій.

Хроматографічна очистка та випадіння:

Використовуються різні хроматографічні методики для очищення інсуліну, включаючи афінну хроматографію, іонний обмін, обернена фазова хроматографія, гідрофобне взаємодія хроматографії та хроматографія розподілу за розмірами. Методи випадіння, такі як випадіння pH та кристалізація з цинком, використовуються для видалення забруднювачів та концентрації білків.

Ренатурація:

Дисолюбований білок розріджується у буфері для ренатурації, щоб сприяти правильному утворенню двосуворотних зв'язків та складанню білка. Хроматографія розчину для складання білків та діаліза також є методами, які використовуються для ренатурації.

Ензимне розщеплення та формулювання:

Трипсин і карбоксипептидаза B використовуються для розщеплення C-пептида, утворюючи активний інсуліновий гетеродимер. Нарешті, кристалізація і ліофілізація використовуються для видалення залишкових солей та буферів, підготовуючи стабільну формуляту. Додаються специфічні додатки (наприклад, цинк і протамін) для задовolenня різних клінічних потреб.

Висновок:

Обробка інсуліну на етапі виготовлення з E. coli є складною. У майбутньому слід зосередитися на оптимізації цих етапів для ефективного, економічного виробництва, щоб задовольнити попит і зменшити вартість.

Yaohai Bio-Pharma також активно шукає глобальних партнерів — інституцій або осіб — і пропонує найбільш конкурентоспроможну компенсацію в галузі. Якщо у вас є будь-які питання, будь ласка, не соромтеся звертатися до нас: [email protected]