Оптимізація процесу очищення рекомбінантного людського інсуліну

В останні роки зростання кількості хворих на цукровий діабет спричинило попит на інсулін, але доступного інсуліну бракує. Ефективне, економічне виробництво інсуліну має вирішальне значення. В основному виробляється через Escherichia coli (E. coli) і дріжджі через швидкий ріст і низьку вартість, E. coli стикається зі складною подальшою обробкою.

Огляд подальшої обробки:

Очищення рекомбінантного людського інсуліну з тілець E. coli включає кілька етапів, включаючи відновлення, промивання, солюбілізацію та окислення, розщеплення, обмін буфера, хроматографічне очищення, осадження, ренатурацію, ферментативне розщеплення та формулювання.

Компанія Yaohai Bio-Pharma може похвалитися великим досвідом виробництва та очищення рекомбінантного інсуліну в поєднанні з командою експертів, що забезпечує високу ефективність виробництва інсуліну. Використовуючи наш досвід сотень проектів, Yaohai люб'язно підсумовує, як оптимізувати процес очищення рекомбінантного інсуліну людини.

Включення Відновлення та миття тіла:

Клітини руйнують за допомогою механічних методів (таких як ультразвукова обробка, гомогенізація під високим тиском) або обробки лізоцимом з подальшим промиванням буферами (що містять сечовину, Triton X-100 тощо) для видалення домішок. Під час миття параметри необхідно оптимізувати, щоб забезпечити якість протеїну, одночасно контролюючи витрати.

Солюбілізація та окислення тіла включення:

Денатуратори високої концентрації (такі як гідрохлорид гуанідину та сечовина) використовуються для розчинення тілець включення з додаванням дитіотреїтолу або β-меркаптоетанолу для запобігання утворенню неправильних дисульфідних зв’язків. pH і температура значно впливають на реакції розчинення та окислення.

Розщеплення та буферний обмін:

Розщеплення бромідом ціану використовується для видалення N-кінцевої ініціючої амінокислоти, але це створює проблеми з токсичністю та низькою специфічністю. За допомогою діалізу, ультрафільтрації або ексклюзійної хроматографії буферний обмін видаляє шкідливі реагенти для підготовки до наступних операцій.

Хроматографічне очищення та осадження:

Для очищення інсуліну використовуються численні хроматографічні методики, включаючи афінну хроматографію, іонообмінну хроматографію, хроматографію з оберненою фазою, хроматографію гідрофобної взаємодії та ексклюзійну хроматографію. Методи осадження, такі як осадження за рН і кристалізація цинку, використовуються для видалення домішок і концентрації білків.

Ренатурація:

Солюбілізований білок розбавляють у ренатураційному буфері для сприяння правильному утворенню дисульфідних зв’язків і згортанню білка. Рідинна хроматографія зі згортанням білків і діаліз також є методами, що використовуються для ренатурації.

Ферментативне розщеплення та формулювання:

Трипсин і карбоксипептидаза В використовуються для розщеплення С-пептиду, утворюючи активний гетеродимер інсуліну. Нарешті, кристалізація та ліофілізація використовуються для видалення залишкових солей і буферів, одержуючи стабільну композицію. Спеціальні добавки (такі як цинк і протамін) додаються для задоволення різних клінічних потреб.

Висновок:

Низхідна обробка інсуліну з E. палички є складним. Майбутня увага повинна бути зосереджена на оптимізації цих кроків для ефективного, економічного виробництва, щоб задовольнити попит і знизити витрати.

Yaohai Bio-Pharma також активно шукає інституційних або індивідуальних глобальних партнерів і пропонує найконкурентнішу компенсацію в галузі. Якщо у вас виникли запитання, зв’яжіться з нами: [email protected]