Відстоювання методів модифікації репортерної РНК

Вибираючи, який метод модифікації репортерної мРНК є кращим, немає однозначної відповіді, оскільки кожен метод і репортерний ген мають свої переваги та застосовні сценарії. Ось деякі поширені методи модифікації мРНК і репортерних генів, а також їхні характеристики та придатність.

Методи модифікації мРНК

Метилювання:

1. m6A: пов’язаний зі стабільністю мРНК, сплайсингом, трансляцією та процесингом мікроРНК. Проблеми виявлення включають вибір і локалізацію антитіл.
2. 5' Cap Nm: покращує стабільність, сплайсинг, поліаденілування та ядерний експорт. Допомагає відрізнити власну РНК від чужорідної.
3. Псевдоуридилування: Змінює кодони, підвищує стабільність і реагує на стрес. Каталізується псевдоуридинсинтазами.

Введення неприродних нуклеотидів:

1. Введено під час транскрипції з подвійною стратегією хімічної модифікації. Це підвищує стабільність, ефективність і експресію білка.

Репортерські гени

1. Ген зеленого флуоресцентного білка (GFP): Переваги: ​​легко виявити, стабільні властивості флуоресценції, нетоксичні для клітин, придатні для візуалізації живих клітин. Недоліки: обмежена інтенсивність флуоресценції.
2. Покращений зелений флуоресцентний білок (eGFP): Переваги: ​​більш ніж у 6 разів яскравіший за GFP дикого типу, що робить його більш придатним як репортерний ген для вивчення експресії генів, регуляції, диференціювання клітин, а також локалізації та транспорту білка в організмах.
3. Червоні флуоресцентні білки (наприклад, mCherry): Переваги: ​​більша довжина хвилі збудження та випромінювання, що призводить до нижчого фону під час внутрішньоклітинного зображення, чудової яскравості флуоресценції та фотостабільності та нижчої клітинної токсичності. Недоліки: може використовуватися не так часто, як GFP, у певних експериментальних умовах.
4. Люцифераза світлячка: Переваги: ​​у присутності АТФ, іонів магнію та кисню він може каталізувати окислення люциферину в оксилюциферин, випромінюючи біолюмінесценцію. Він придатний для використання як контроль для вивчення ефективності трансляції цільових генів у клітинах ссавців, життєздатності клітин та аналізів зображень in vivo.

Висновок

При виборі методу модифікації репортерної мРНК перевага залежить від конкретних експериментальних цілей, передумов дослідження та умов експерименту. Наприклад, якщо потрібна висока чутливість, eGFP може бути кращим вибором. Якщо зображення з більшою довжиною хвилі необхідно для зменшення фонових перешкод, червоні флуоресцентні білки, такі як mCherry, можуть бути більш придатними. Крім того, на основі конкретних потреб модифікації мРНК (наприклад, підвищення стабільності, підвищення ефективності трансляції) можна вибрати відповідний метод модифікації.

Yaohai Bio-Pharma, як перший і найбільший CRDMO мікробних біопрепаратів у Великому Китаї, пропонує комплексні індивідуальні рішення або окремі послуги, починаючи від синтезу РНК, інженерії та конструювання штамів, розробки процесів на першому та нижчому рівнях, до GMP чи не - Виробництво лікарських речовин на рівні GMP, а також послуги з наповнення та обробки для різноманітних модальностей, таких як мРНК, цирРНК, плазмідна РНК, рекомбінантні білки, пептиди, ферменти, однодоменні антитіла та VLPs для використання у людей та ветеринарії.

Yaohai Bio-Pharma також активно шукає інституційних або індивідуальних глобальних партнерів і пропонує найконкурентнішу компенсацію в галузі. Якщо у вас виникли запитання, зв’яжіться з нами: [email protected]