Підтримка Методів Модифікації Репортного РНК

При виборі, який метод модифікації mRNA звітника є перевагою, немає однозначної відповіді, оскільки кожен метод і ген звітника має свої переваги та придатні сценарії застосування. Ось деякі загальні методи модифікації mRNA та гени звітники, разом з їхніми характеристиками та придатністю.

методи модифікації mRNA

Метилізація:

1. m6A : Сполучена з стабільністю mRNA, сплайсингом, перекладом та обробкою miRNA. Виклики виявлення включають вибір антитіла та локалізацію.
2. 5' Кап Нм : Покращує стабільність, сплайсинг, поліаденіляцію та ядерний експорт. Допомагає розрізняти власне RNA від чужого RNA.
3. Псевдовузьоловина : Змінює кодони, покращує стабільність та реагує на стрес. Катализується псевдовузьолиновими синтазами.

Введення ненатуральних нуклеотидів:

1. Впроваджено під час транскрипції за допомогою стратегії подвійної хімічної модифікації. Це покращує стійкість, ефективність та виразку протеїну.

Репортерні гени

1. Ген зелено fluorescing протеїну (GFP) : Переваги: Легко виявляти, стабільні властивості флуоресценції, безпечний для клітин, придатний для імажингу живих клітин. Недоліки: Обмежена інтенсивність флуоресценції.
2. Покращений зелений fluorescing протеїн (eGFP) : Переваги: Більш ніж у 6 разів ярчей за дикотипним GFP, що робить його більш придатним як репортерний ген для вивчення вираження генів, регуляції, диференціації клітин та локалізації та транспорту протеїнів у організмах.
3. Червоні fluorescing протеїни (наприклад, mCherry) : Переваги: Більша довжина хвиль екситації та емісії, що призводить до меншого фону під час інтраклітинного імажингу, відмінна яскравість флуоресценції та фотостійкість, а також менша клітинна токсичність. Недоліки: Можливо, не так часто використовується як GFP у певних експериментальних умовах.
4. Люцифераза святої кравчиці : Переваги: У наявності АТФ, іонів магнію та кисню, вона може катализувати окислення люциферину у оксилюциферин, виділяючи біолюмінесценцію. Підходить для використання як контроль при дослідженні ефективності трансляції цільових генів у мамутиних клітинах, вивчення життєздатності клітин та асай для ін віво імажингу.

Висновок

Обираючи метод модифікації репортёрського мРНК, слід керуватися конкретними експериментальними метами, науковими підставами та експериментальними умовами. Наприклад, якщо потрібна висока чутливість, eGFP може бути кращим вибором. Якщо необхідне зображення у довшому хвильовому діапазоні для зменшення фонової інтерференції, червоні флуоресцентні протеїни, такі як mCherry, можуть бути більш придатними. Крім того, враховуючи конкретні потреби модифікації мРНК (наприклад, підвищення стабільності, покращення ефективності трансляції), можна вибрати відповідний метод модифікації.

Як перша та найбільша компанія CRDMO біологічних продуктів微生物 в Великому Китаї, Yaohai Bio-Pharma пропонує комплексні поетапні спрямовані рішення або окремі послуги, включаючи синтез РНК, інженерію та створення штамів, розробку процесів верхнього та нижнього потоку, виготовлення речовини лікарських засобів за GMP чи не-GMP стандартами, а також послуги заповнення та упаковки для різноманітних модальностей, таких як mRNA, circRNA, плазмідна РНК, рекомбінантні белки, пептиди, ензими, однообласткові антитіла та VLP для людського та ветеринарного використання.

Yaohai Bio-Pharma також активно шукає глобальних партнерів — інституцій або осіб — і пропонує найбільш конкурентоспроможну компенсацію в галузі. Якщо у вас є будь-які питання, будь ласка, не соромтеся звертатися до нас: [email protected]