Plazmid: Malá kruhová molekula DNA s veľkým potenciálom

Plazmidy, malé kruhové molekuly DNA, slúžia ako nevyhnutné vektory pre rekombináciu DNA vo výskume molekulárnej biológie a génovej terapii. Výťažok a kvalita plazmidov sú rozhodujúce, pričom podiel nadzávitnice a obsah endotoxínu sú dva významné faktory ovplyvňujúce kvalitu plazmidov.

Podtypy plazmidov

Plazmidy extrahované z Escherichia coli (E. coli) existujú v rôznych podtypoch: supercoiled (SC), otvorené kruhové (OC) a lineárne (L) formy (obrázok 1). Medzi nimi superšpirálové plazmidy vykazujú vynikajúcu stabilitu, antigenicitu a vysokú účinnosť transfekcie a expresie.

Obrázok 1. Schematický diagram bežných podtypov plazmidov

Pri elektroforéze plazmidovej DNA na agarózovom géli je poradie rýchlosti migrácie supersvinutá DNA, lineárna DNA a otvorená kruhová DNA (obrázok 2).

Obrázok 2. Schéma migrácie rôznych plazmidových podtypov elektroforézou na agarózovom géli

Spoločnosť Yaohai Bio-Pharma neustále zdokonaľovala svoje procesy a techniky, aby zabezpečila, že podiel vinutých plazmidov transfekčného stupňa je ≥ 85 % a podiel plazmidov výskumného stupňa ≥ 50 %. Nasleduje demonštrácia prípadu (obrázok 3), kde je elektroforéza na agarózovom géli kombinovaná so softvérom Gel-Pro Analyzer na detekciu nadzávitnicovej časti.

Obrázok 3. Výsledky kontroly kvality proporcie plazmidovej supercoiled

Endotoxín

Endotoxín, zložka bunkovej steny gramnegatívnych baktérií, pozostáva predovšetkým z lipopolysacharidu A (LPS-A) ako jeho toxickej zložky. Počas extrakcie plazmidov sa endotoxín uvoľňuje do lyzačného roztoku, čo vážne ovplyvňuje účinnosť transfekcie plazmidov do buniek. Okrem toho môže aktivovať nešpecifické imunitné reakcie v bunkách, čo vedie k falošne pozitívnym výsledkom v experimentoch.

Spoločnosť Yaohai Bio-Pharma používa prístup „nezavedenia“ a „vysokého odstraňovania“, pričom prísne kontroluje používanie činidiel a materiálov obsahujúcich endotoxín počas celého procesu čistenia. Spoločnosť tiež vyvinula účinnú metódu odstraňovania endotoxínov, ktorá ponúka tri úrovne obsahu endotoxínu: ≤0.1 EU/µg, ≤0.01 EU/µg a ≤0.005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma má vysokovýkonnú servisnú linku na extrakciu plazmidov, ktorá je schopná dodať 1 mg extrahovaných plazmidov už za jeden týždeň. Štandardne poskytuje viac ako sedem testov kontroly kvality (QC), aby sa zabezpečilo dodanie vysokokvalitných plazmidov s vysokým štandardom z viacerých perspektív.

Aktívne tiež hľadáme inštitucionálnych alebo individuálnych globálnych partnerov. Ponúkame najkonkurencieschopnejšiu kompenzáciu v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]