Kontrola kvality a aplikácie rekombinantných bílkovín

Kontrola kvality rekombinantných bílkovín je kritická pre spoľahlivosť a reprodukovateľnosť experimentálnych údajov. Každý krok, od návrhu projektu po výrobný proces, vyžaduje prísne strategie kontroly kvality.

Strategie kontroly kvality

Priemyselný sektor dodržiava prísne štandardné operačné postupy, zatiaľ čo akademická komunita potrebuje zvýšiť profesionálne poznatky na zlepšenie reprodukovateľnosti údajov. Bílka so špecifickými biologickými aplikáciami alebo biochemickými vlastnosťami vyžadujú prispôsobené strategie kontroly kvality (QC).

Náročné príklady a riešenia

Yaohai Bio-Pharma má rozsiahle skúsenosti v oblasti produkcie a očistenia rekombinantných bílkovín, spolu s tímom odborníkov, čo zabezpečuje, že vaša produkcia bílkovín bude dokončená s vysokou čistotou. Na základe skúseností zo stoviek projektov stručne shrnuje Yaohai, ako optimalizovať očistenie bílkovín.

Bílka väzby nukleových kyselín: Kroky odstránenia nukleových kyselín, ako sú nukleázy alebo PEI precipitácia, sú nevyhnutné. Pomer A260nm/A280nm sa monitoruje na detekciu kontaminácie nukleovými kyselinami.

Myšia Ferritin Tiažká Ťažka 1 pre kryoelektrónovú mikroskópiu: Kroky čistenia musia byť optimalizované a musia sa pridať nukleázy na zníženie pomeru A260nm/A280nm a zabezpečenie čistoty proteínov.

Chiméricky Proteín Človek dsRBEC: Lýza buniek používa buffor obsahujúci uréu, nasledovaný refaldovacím krokom na získanie funkčne aktívnych proteínov.

Proteiny Väzajúce Divalentné Kationty: Počas expresie a čistenia musia byť pridané špecifické divalentné kationty a chelátové agenty sa majú vyhnúť.

Železo-Slfátové Proteíny: Imidazol sa má vyhnúť, aby sa zabránilo rušeniu [2Fe ± 2S] skupiny, čo zabezpečí správne sčítanie a funkciu proteínu.

Riešiteľný Fragment LLT1: Mutantný dizajn optimalizuje tvorbu disulfidových väzíb a zloženie bílkovín, čo viede k stabilným a vysokovýnosnym bílkovinám.

Kryštalinizácia kinázy CLK1: Spoločné expresie s λ-fosfatazą odstráňujú fosfáty z fosforylačných miest a veličinská exluzióvná chromatografia (SEC) a anionová výmenná chromatografia sa používajú na získanie homogénneho CLK1 bez heterogénnej fosforylacie.

Bílkoviny pre antigenové účely: Hodnotenie čistoty je nevyhnutné na vyholenie kontaminácie vysoce imunogennými bílkovinami. Pre štrukturálne epitopové antitily musí byť zachovaná trojrozmerná konformácia antigenu.

Bílkovinyách predkladajúce sa agregácii: Používajú sa stratégie ako testovanie rôznych štrem a zníženie teploty pěstovania na obmedzenie problémov s agregáciou a navrhujú sa rýchle metódy čistenia.

Odstránenie endotoxínov: Metódy ako pozitívne nabitá chromatografia a afinitná chromatografia polycation ligandov odstraňujú endotoxíny, čím sa zabezpečí, že úrovne LPS sú pod limitmi aplikácie.

Bílkovinné komplexy: Podjednotky sa vyjadrujú oddelene a sú potom zložené in vitro alebo spoločne vyjadrené na vytvorenie funkčných komplexov. Integrity komplexu sa hodnotí podľa homogenity a molárnej hmotnosti.

Záver

Výroba proteínov začína strategickým návrhom, kde sa berú do úvahy biochemické vlastnosti a aplikácie. Počas vyjadrovania, čistenia a kvalitnej kontroly sú podmienky a metódy optimalizované pre stabilitu, nepripojenie a natívny stav. Čisté proteíny slúžia rôznym ďalším použitiam, ako je biofyzikálna charakterizácia.

Yaohai Bio-Pharma aktivne hľadá globálnych partnerov, ktorí sú inštitúciami alebo jednotlivcami, a ponúka najkonkurenceschopnejšie odmeny v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]