Kontrola kvality a aplikácie rekombinantných proteínov

Kontrola kvality rekombinantných proteínov je rozhodujúca pre spoľahlivosť a reprodukovateľnosť experimentálnych údajov. Každý krok, od návrhu projektu až po výrobný proces, si vyžaduje prísne stratégie kontroly kvality.

Stratégie kontroly kvality

Priemyselný sektor dodržiava prísne štandardné prevádzkové postupy, zatiaľ čo akademická obec potrebuje zlepšiť odborné znalosti, aby sa zlepšila reprodukovateľnosť údajov. Proteíny so špecifickými biologickými aplikáciami alebo biochemickými vlastnosťami vyžadujú prispôsobené stratégie kontroly kvality (QC).

Náročné príklady a riešenia

Yaohai Bio-Pharma sa môže pochváliť rozsiahlymi skúsenosťami s produkciou a čistením rekombinantných proteínov v spojení s tímom odborníkov, ktorí zaisťujú, že vaša produkcia proteínov bude dokončená s vysokou čistotou. Využitím našich skúseností zo stoviek projektov Yaohai láskavo zhŕňa, ako optimalizovať čistenie bielkovín.

Proteíny viažuce nukleové kyseliny: Kroky odstraňovania nukleových kyselín, ako sú nukleázy alebo zrážanie PEI, sú nevyhnutné. Pomer A260nm/A280nm sa monitoruje na detekciu kontaminácie nukleovou kyselinou.

Myš Feritín Heavy Chain 1 pre cryo-EM: Je potrebné optimalizovať purifikačné kroky a pridať nukleázy, aby sa znížil pomer A260nm/A280nm a zabezpečila sa čistota proteínu.

Chimerický proteínový ľudský dsRBEC: Bunková lýza využíva tlmivý roztok obsahujúci močovinu, po ktorom nasleduje opätovné skladanie na kolóne, aby sa získali funkčne aktívne proteíny.

Proteíny viažuce dvojmocné katióny: Počas expresie a purifikácie sa musia pridať špecifické dvojmocné katióny a je potrebné sa vyhnúť chelatačným činidlám.

Železo-sírové proteíny: Imidazolu sa treba vyhnúť, aby sa zabránilo narušeniu klastra [2Fe ± 2S], čím sa zabezpečí správne skladanie a funkcia proteínu.

Rozpustný fragment LLT1: Mutantný dizajn optimalizuje tvorbu disulfidových väzieb a skladanie proteínov, výsledkom čoho sú stabilné proteíny s vysokým výťažkom.

Kryštalizácia kinázy CLK1: Koexpresia s λ-fosfatázou odstraňuje fosfáty z fosforylačných miest a na získanie homogénneho CLK1 bez heterogénnej fosforylácie sa používa vylučovacia chromatografia (SEC) a aniónová výmenná chromatografia.

Proteíny na použitie antigénu: Hodnotenie čistoty je nevyhnutné, aby sa zabránilo kontaminácii vysoko imunogénnymi proteínmi. Pre štrukturálne epitopové protilátky sa musí zachovať trojrozmerná konformácia antigénu.

Proteíny náchylné na agregáciu: Na obmedzenie problémov s agregáciou sa používajú stratégie ako skríning rôznych kmeňov a znižovanie teplôt kultivácie a navrhujú sa stratégie rýchleho čistenia.

Odstránenie endotoxínu: Metódy, ako je chromatografia s pozitívnym nábojom a afinitná chromatografia s polykatiónovým ligandom, odstraňujú endotoxíny a zabezpečujú, že hladiny LPS sú pod aplikačnými limitmi.

Proteínové komplexy: Podjednotky sú exprimované oddelene a zostavené in vitro alebo koexprimované za vzniku funkčných komplexov. Integrita komplexu sa hodnotí podľa homogenity a molárnej hmotnosti.

záver

Produkcia bielkovín začína strategickým návrhom, zvažujúc biochemické vlastnosti a aplikácie. Počas expresie, purifikácie a QC sú podmienky a metódy optimalizované pre stabilitu, neagregáciu a natívny stav. Purifikované proteíny slúžia na rôzne následné použitia, ako je biofyzikálna charakterizácia.

Yaohai Bio-Pharma tiež aktívne hľadá inštitucionálnych alebo individuálnych globálnych partnerov a ponúka najkonkurencieschopnejšiu kompenzáciu v tomto odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]