Optimalizácia purifikačného procesu pre rekombinantný ľudský inzulín

Rast pacientov s cukrovkou v posledných rokoch poháňal dopyt po inzulíne, no cenovo dostupného inzulínu je nedostatok. Rozhodujúca je efektívna a ekonomická produkcia inzulínu. E. coli, ktorá sa vyrába hlavne prostredníctvom Escherichia coli (E. coli) a kvasiniek, je kvôli rýchlemu rastu a nízkej cene vystavená zložitému spracovaniu.

Prehľad následného spracovania:

Purifikácia rekombinantného ľudského inzulínu z inklúznych teliesok E. coli zahŕňa viacero krokov, vrátane získania, premývania, solubilizácie a oxidácie, štiepenia, výmeny pufra, chromatografického čistenia, precipitácie, renaturácie, enzymatického štiepenia a formulácie.

Spoločnosť Yaohai Bio-Pharma sa môže pochváliť rozsiahlymi skúsenosťami s výrobou a čistením rekombinantného inzulínu v spojení s tímom odborníkov, ktorí zaisťujú, že produkcia inzulínu bude dokončená s vysokou účinnosťou. Využitím našich skúseností zo stoviek projektov Yaohai láskavo sumarizuje, ako optimalizovať následný purifikačný proces pre rekombinantný ľudský inzulín.

Regenerácia a umývanie tela Inclusion Body:

Bunky sa rozrušia pomocou mechanických metód (ako je ultrazvuk, vysokotlaková homogenizácia) alebo ošetrenie lyzozýmom, po ktorom nasleduje premývanie pufrov (obsahujúcich močovinu, Triton X-100 atď.), aby sa odstránili nečistoty. Počas prania je potrebné optimalizovať parametre, aby sa zabezpečila kvalita bielkovín a zároveň boli pod kontrolou náklady.

Solubilizácia a oxidácia inklúznych teliesok:

Na solubilizáciu inklúznych teliesok sa používajú denaturanty s vysokou koncentráciou (ako je guanidín hydrochlorid a močovina), pričom sa pridáva ditiotreitol alebo β-merkaptoetanol, aby sa zabránilo tvorbe nesprávnych disulfidových väzieb. pH a teplota významne ovplyvňujú solubilizačné a oxidačné reakcie.

Štiepenie a výmena pufra:

Štiepenie brómkyánom sa používa na odstránenie N-koncovej iniciačnej aminokyseliny, ale spôsobuje problémy s toxicitou a nízkou špecifickosťou. Prostredníctvom dialýzy, ultrafiltrácie alebo vylučovacej chromatografie odstraňuje výmena pufra škodlivé činidlá pri príprave na následné operácie.

Chromatografické čistenie a zrážanie:

Na čistenie inzulínu sa používajú viaceré chromatografické techniky, vrátane afinitnej chromatografie, iónomeničovej chromatografie, chromatografie na reverznej fáze, chromatografie s hydrofóbnou interakciou a vylučovacej chromatografie. Na odstránenie nečistôt a zahustenie proteínov sa používajú zrážacie metódy, ako je zrážanie pH a kryštalizácia zinku.

Renaturácia:

Solubilizovaný proteín sa zriedi v renaturačnom pufri, aby sa podporila správna tvorba disulfidových väzieb a skladanie proteínov. Kvapalná chromatografia na skladanie proteínov a dialýza sú tiež metódy používané na renaturáciu.

Enzymatické štiepenie a formulácia:

Trypsín a karboxypeptidáza B sa používajú na štiepenie C-peptidu za vzniku aktívneho heterodiméru inzulínu. Nakoniec sa použije kryštalizácia a lyofilizácia na odstránenie zvyškov solí a pufrov, čím sa pripraví stabilná formulácia. Špecifické prísady (ako je zinok a protamín) sa pridávajú na splnenie rôznych klinických potrieb.

záver:

Následné spracovanie inzulínu z E. coli je komplexný. Budúca pozornosť by sa mala zamerať na optimalizáciu týchto krokov pre efektívnu, ekonomickú výrobu, aby uspokojila dopyt a znížila náklady.

Yaohai Bio-Pharma tiež aktívne hľadá inštitucionálnych alebo individuálnych globálnych partnerov a ponúka najkonkurencieschopnejšiu kompenzáciu v tomto odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]