Optimalizácia čistiacích procesov pre rekombinantný ľudský inzulin

V posledných rokoch rast počtu pacientov s diabetom stimuloval poptávku po inzulíne, ale dostupný inzulín je v krátkosti. Efektívna a ekonomická výroba inzulínu je kľúčová. Vyrábajú sa hlavne pomocou Escherichia coli (E. coli) a droždie kvôli rýchlemu rastu a nízkym nákladom, pričom E. coli čelí zložitejšiemu ďalšiemu zpracovaniu.

Prehľad ďalšieho zpracovania:

Čistenie rekombinantného ľudského inzulínu z inklúzióvných teliesok E. coli zahŕňa viacero krokov, vrátane obnovy, mytí, rozpúšťania a oxidácie, štvrtenia, výmeny bufférovu, chromatografického čistenia, precipitácie, renatúracie, enzymatického štvorenia a formulácie.

Yaohai Bio-Pharma má rozsiahle skúsenosti v produkcií a čistení rekombinantného inzulínu, spolu s tímom odborníkov, čo zabezpečuje vysoce efektívnu produkciu vášho inzulínu. S využitím skúseností zo stoviek projektov stručne shrnuje Yaohai, ako optimalizovať proces ďalšieho čistenia rekombinantného ľudského inzulínu.

Vynášanie a mytíe inklúziových telies:

Bunky sú disruptované pomocou mechanických metód (ako ultrazvuk, vysokotlaká homogenizácia) alebo liezomycinovou úpravou, následovanou mytím vo vyživení (obsahujúcich ureu, Triton X-100 atď.) na odstránenie nečistôt. Počas mytiu je potrebné optimalizovať parametre, aby sa zabezpečila kvalita bielek pri kontrole nákladov.

Dissolvačnosť inklúziových telies a oxidácia:

Používajú sa vysokokonzentračné denatúranti (ako guanidín chlorid a urea) na rozpúšťanie inklúziových telies, pridávajú sa dithiothreitol alebo β-mercaptoethanol na predchádzanie tvorbe nesprávnych disulfidných väzieb. pH a teplota významne ovplyvňujú rozpúšťacie a oxidácie reakcie.

Klepanie a výmena vyživenia:

Rozčleňovanie cyjanogenom bromidom sa používa na odstránenie N-terminálneho výchozeho aminokyseliny, ale spôsobuje problémy s toxicitou a nízkou špecifickosťou. Pomocou dialýzy, ultrafiltrácie alebo chromatografie rozdelenia podľa veľkosti sa pri výmene buffera odstraňujú škodlivé reaktanty v príprave na nasledujúce operácie.

Chromatografická čistenie a vykrystalkovanie:

Používajú sa rôzne chromatografické techniky na čistenie inzulinu, vrátane afinnej chromatografie, ionovej chromatografie, chromatografie v opačnej fáze, hydrofobnej interakčnej chromatografie a chromatografie rozdelenia podľa veľkosti. Metódy vykrystalkovania, ako je vykrystalkovanie pH a zinkové krystalizácia, sa používajú na odstránenie nečistôt a koncentráciu bílkovín.

Renatúracia:

rozpustené bílkoviny sa diluujú v renatúračnom buffere na podporu správneho tvorby disulfidových väzieb a sklodenia bílkovín. Chromatografia pri sklodení bílkovín a dialýza sú tiež metódy používané na renatúraciu.

Enzymatické rozčleňovanie a formulovanie:

Trypsin a karboxypeptidáza B sa používajú na odsekanie C-peptídu, čím sa tvorí aktívny insulinový heterodimer. Nakoniec sa používajú krystalizácia a lyofilizácia na odstránenie zvyšných solí a búferov, pripravujúc stabilnú formuláciu. Pridávajú sa špecifické prísady (ako je cink a protamín), aby sa splnili rôzne klinické požiadavky.

Záver:

Dohodnotenie úpravy inzulinu z E. coli je komplikované. Budúci fokus by mal byť na optimalizácii týchto krokov pre efektívnu, ekonomickú výrobu, aby sa splnil dopyt a znížili sa náklady.

Yaohai Bio-Pharma aktivne hľadá globálnych partnerov, ktorí sú inštitúciami alebo jednotlivcami, a ponúka najkonkurenceschopnejšie odmeny v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]