Plasmídeo: Uma Pequena Molécula de DNA Circular com Grande Potencial

Plasmídeos, pequenas moléculas circulares de DNA, servem como vetores essenciais para recombinação de DNA em pesquisas de biologia molecular e terapia genética. O rendimento e a qualidade dos plasmídeos são cruciais, com a proporção superenrolada e o conteúdo de endotoxinas sendo dois fatores significativos que afetam a qualidade do plasmídeo.

Subtipos de Plasmídeos

Plasmídeos extraídos de Escherichia coli (E. coli) existem em vários subtipos: formas superenroladas (SC), circulares abertas (OC) e lineares (L) (Figura 1). Entre eles, os plasmídeos superenrolados apresentam excelente estabilidade, antigenicidade e alta eficiência de transfecção e expressão.

Figura 1. Diagrama Esquemático dos Subtipos Comuns de Plasmídeos

Na eletroforese em gel de agarose de DNA de plasmídeo, a ordem da velocidade de migração é DNA superenrolado, DNA linear e DNA circular aberto (Figura 2).

Figura 2. Padrão de Migração da Eletroforese em Gel de Agarose de Diferentes Subtipos de Plasmídeos

A Yaohai Bio-Pharma tem aprimorado continuamente seus processos e técnicas para garantir que a proporção de superespiralização de plasmídeos de grau de transfeção seja ≥85% e a de plasmídeos de grau de pesquisa seja ≥50%. A seguir, há uma demonstração de caso (Figura 3), na qual a eletroforese em gel de agarose é combinada com o software Gel-Pro Analyzer para detectar a proporção de superespiralização.

Figura 3. Resultados da Inspeção de Qualidade da Proporção de Superespiralização de Plasmídeos

Endotoxina

O endotoxina, um componente da parede celular de bactérias Gram-negativas, consiste principalmente em lipopolissacarídeo A (LPS-A) como sua parte tóxica. Durante a extração de plasmídeos, o endotoxina é liberado na solução de lise, afetando severamente a eficiência da transfeção de plasmídeos nas células. Além disso, pode ativar respostas imunológicas não específicas nas células, levando a falsos positivos nos experimentos.

Yaohai Bio-Pharma adota uma abordagem de "não introdução" e "alta remoção", controlando rigorosamente o uso de reagentes e materiais contendo endotoxina durante todo o processo de purificação. A empresa também desenvolveu um método eficiente de remoção de endotoxinas, oferecendo três níveis de conteúdo de endotoxina: ≤0,1 EU/µg, ≤0,01 EU/µg e ≤0,005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma possui uma linha de serviço de extração de plasmídeos de alta throughput, capaz de fornecer 1 mg de plasmídeos extraídos em até uma semana. Por padrão, fornece mais de sete testes de controle de qualidade (QC) para garantir a entrega de plasmídeos de alta qualidade e alto padrão sob várias perspectivas.

Também estamos ativamente buscando parceiros globais institucionais ou individuais. Oferecemos a compensação mais competitiva da indústria. Se você tiver alguma dúvida, sinta-se à vontade para nos contatar: [email protected]