Plasmídeo: Uma pequena molécula circular de DNA com grande potencial

Plasmídeos, pequenas moléculas circulares de DNA, servem como vetores essenciais para recombinação de DNA em pesquisa de biologia molecular e terapia genética. O rendimento e a qualidade dos plasmídeos são cruciais, com proporção superenrolada e conteúdo de endotoxina sendo dois fatores significativos que afetam a qualidade do plasmídeo.

Subtipos de plasmídeos

Plasmídeos extraídos de Escherichia coli (E. coli) existem em vários subtipos: formas superenroladas (SC), circulares abertas (OC) e lineares (L) (Figura 1). Entre elas, os plasmídeos superenrolados exibem excelente estabilidade, antigenicidade e alta eficiência de transfecção e expressão.

Figura 1. Diagrama esquemático de subtipos comuns de plasmídeos

Na eletroforese em gel de agarose de DNA plasmídeo, a ordem de velocidade de migração é DNA superenrolado, DNA linear e DNA circular aberto (Figura 2).

Figura 2. Padrão de migração de diferentes subtipos de plasmídeos por eletroforese em gel de agarose

A Yaohai Bio-Pharma tem melhorado continuamente seus processos e técnicas para garantir que a proporção superenrolada de plasmídeos de grau de transfecção seja ≥85% e a de plasmídeos de grau de pesquisa seja ≥50%. A seguir está uma demonstração de caso (Figura 3), onde a eletroforese em gel de agarose é combinada com o software Gel-Pro Analyzer para detectar a proporção superenrolada.

Figura 3. Resultados da inspeção de qualidade da proporção superenrolada do plasmídeo

Endotoxina

Endotoxina, um componente da parede celular de bactérias Gram-negativas, consiste principalmente de lipopolissacarídeo A (LPS-A) como seu componente tóxico. Durante a extração do plasmídeo, a endotoxina é liberada na solução de lise, afetando severamente a eficiência da transfecção do plasmídeo para as células. Além disso, pode ativar respostas imunes não específicas nas células, levando a falsos positivos em experimentos.

A Yaohai Bio-Pharma adota uma abordagem de "não introdução" e "alta remoção", controlando rigorosamente o uso de reagentes e materiais contendo endotoxina durante todo o processo de purificação. A empresa também desenvolveu um método eficiente de remoção de endotoxina, oferecendo três níveis de conteúdo de endotoxina: ≤0.1 UE/µg, ≤0.01 UE/µg e ≤0.005 UE/µg.

A Yaohai Bio-Pharma possui uma linha de serviço de extração de plasmídeos de alto rendimento, capaz de entregar 1 mg de plasmídeos extraídos em apenas uma semana. Por padrão, ela fornece mais de sete testes de controle de qualidade (QC) para garantir a entrega de plasmídeos de alta qualidade e alto padrão de múltiplas perspectivas.

Também procuramos ativamente parceiros globais institucionais ou individuais. Oferecemos a remuneração mais competitiva do setor. Se você tiver alguma dúvida, não hesite em nos contatar: [email protected]