Controle de Qualidade e Aplicações de Proteínas Recombinantes

O controle de qualidade de proteínas recombinantes é crucial para a confiabilidade e reprodutibilidade de dados experimentais. Cada etapa, do design do projeto ao processo de produção, requer estratégias rigorosas de controle de qualidade.

Estratégias de Controle de Qualidade

O setor industrial adere a procedimentos operacionais padrão rigorosos, enquanto a comunidade acadêmica precisa aprimorar o conhecimento profissional para melhorar a reprodutibilidade dos dados. Proteínas com aplicações biológicas específicas ou características bioquímicas exigem estratégias de controle de qualidade (QC) personalizadas.

Exemplos e soluções desafiadoras

A Yaohai Bio-Pharma ostenta ampla experiência em produção e purificação de proteína recombinante, juntamente com uma equipe de especialistas, garantindo que sua produção de proteína seja concluída com alta pureza. Aproveitando nossa experiência de centenas de projetos, a Yaohai gentilmente resume como otimizar a purificação de proteína.

Proteínas de ligação a ácidos nucleicos: Etapas de remoção de ácido nucleico, como nucleases ou precipitação de PEI, são necessárias. A razão A260nm/A280nm é monitorada para detectar contaminação de ácido nucleico.

Cadeia pesada de ferritina de camundongo 1 para crio-EM: As etapas de purificação precisam ser otimizadas e nucleases precisam ser adicionadas para reduzir a proporção A260nm/A280nm e garantir a pureza da proteína.

Proteína quimérica humana dsRBEC: A lise celular utiliza um tampão contendo ureia, seguido de redobramento na coluna para obter proteínas funcionalmente ativas.

Proteínas que se ligam a cátions divalentes: Cátions divalentes específicos devem ser adicionados durante a expressão e purificação, e agentes quelantes devem ser evitados.

Proteínas de Ferro-Enxofre: O imidazol deve ser evitado para prevenir a ruptura do cluster [2Fe ± 2S], garantindo o correto dobramento e função da proteína.

Fragmento solúvel de LLT1: O design mutante otimiza a formação de ligações dissulfeto e o dobramento de proteínas, resultando em proteínas estáveis ​​e de alto rendimento.

Cristalização da cinase CLK1: A coexpressão com λ-fosfatase remove fosfatos dos locais de fosforilação, e a cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) e a cromatografia de troca aniônica são usadas para obter CLK1 homogêneo sem fosforilação heterogênea.

Proteínas para uso de antígenos: A avaliação da pureza é necessária para evitar contaminação com proteínas altamente imunogênicas. Para anticorpos de epítopo estrutural, a conformação tridimensional do antígeno deve ser mantida.

Proteínas propensas à agregação: Estratégias como triagem de diferentes cepas e redução de temperaturas de cultivo são empregadas para limitar problemas de agregação, e estratégias de purificação rápida são projetadas.

Remoção de endotoxinas: Métodos como cromatografia de carga positiva e cromatografia de afinidade de ligante policátion removem endotoxinas, garantindo que os níveis de LPS estejam abaixo dos limites de aplicação.

Complexos de proteínas: Subunidades são expressas separadamente e montadas in vitro ou coexpressas para formar complexos funcionais. A integridade do complexo é avaliada pela homogeneidade e massa molar.

Conclusão

A produção de proteínas começa com o design estratégico, considerando características bioquímicas e aplicações. Durante a expressão, purificação e QC, as condições e métodos são otimizados para estabilidade, não agregação e estado nativo. Proteínas purificadas atendem a vários usos posteriores, como caracterização biofísica.

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