Оптимизирање на клеточниот интегритет на E. coli за производство на биофарма

Во областа на биофармацевтските производи, Escherichia coli (E. coli) игра витална улога како домаќин за изразување на рекомбинантните протеини. Клеточниот интегритет на E. coli е од клучно значење за приносот на протеините, квалитетот и трошоците за производство. Овој интегритет првенствено ја вклучува структурата и функцијата на внатрешната мембрана (IM) и надворешната мембрана (OM).

Yaohai Bio-Pharma има 15 години во E. coli ферментација и изразување на рекомбинантен протеин. Ние користиме различни стратегии за одржување на висок клеточен интегритет на E. coli, приносот на плазмидот надминува 1 g/L во рамките на циклусот на одгледување од 30 часа. Потпирајќи се на големото искуство во микробиолошката експресија, Yaohai Bio-Pharma сумираше неколку ефективни стратегии за следење и подобрување на клеточниот интегритет на E. coli за време на биофармацевтското производство.

Техники за следење на клеточниот интегритет на E. coli

Проточна цитометрија: Користи флуоресцентни бои за да ги разликува клеточните состојби, како што е пропидиум јодид за откривање на одржливоста на клетките и SYTO9 за проценка на пропустливоста на ОМ. Сепак, тоа бара висока цена на дамки и сложени операции.

Колориметриски методи: Одразувајте ја лизата на клетките со откривање на содржината на ДНК, ензимските активности итн., во супернатантот, како на пример користење на комплетот за реагенс PicoGreen и анализи на активноста на алкална фосфатаза. Овие методи, сепак, се незгодни и бараат скапи реагенси.

Течна хроматографија со високи перформанси: Се користи за офлајн откривање на концентрации на екстрацелуларниот производ за да се процени истекувањето на ОМ. Сепак, неговата автоматизација е сложена и времето за анализа е долго.

Техники на вибрациона спектроскопија: Како што се блиско-инфрацрвена и средно-инфрацрвена спектроскопија, кои имаат потенцијални апликации, но бараат надминување на спектралните пречки и предизвиците за анализа на податоци.

Диелектрична спектроскопија: го проценува интегритетот на мембраната со мерење на импедансата на клеточните суспензии, овозможувајќи онлајн мониторинг во реално време. Сепак, тој е подложен на пречки и калибрирањето е тешко.

Биосензори: Може да детектираат соединенија што протекуваат од внатрешноста на клетките или периплазмата, но се соочуваат со проблеми како што се тешкотии со регенерација на сензорот.

Мерења на вискозност и густина: Ниска цена и брза анализа, но немаат селективност и бараат разгледување на податоци од повеќе серии за да се процени.

Фактори кои влијаат на интегритетот на клетките

Инженеринг на соеви: Го менува интегритетот на ОМ преку генетски инженеринг, како што се мутирачките гени на липопротеините, но може да влијае на растот на соеви.

Индуциран стрес: Преголемата експресија на рекомбинантните протеини доведува до метаболичко оптоварување, што влијае на клеточната физиологија. Затоа, неопходно е разумно регулирање на нивоата на изразување.

Стапка на хранење на подлогата: И претерано високите и ниските стапки на хранење влијаат на лизата на клетките и на интегритетот на ОМ.

Температура и аерација: високите температури и ниската достапност на кислород го зголемуваат стресот на изразување и истекувањето на ОМ, соодветно, но специфичните ефекти варираат.

Осмотици: Се користат за ослободување на периплазматски протеини, но ја оштетуваат одржливоста на клетките, ограничувајќи ја нивната примена.

Заклучок Идните истражувања треба да истражуваат подлабоко во механизмите и условите за поправка на мембраната за прецизно да го контролираат интегритетот на клеточната мембрана. Се очекува оптимизирањето на методите за следење и анализата на факторите кои влијаат да го подобрат квалитетот на производот, а со тоа да го поттикнат развојот на биофармацевтската индустрија.

Исто така, активно бараме институционални или индивидуални глобални партнери. Ние нудиме најконкурентна компензација во индустријата. Ако имате какви било прашања, ве молиме слободно контактирајте не на [email protected]