Начини за подобрување на добивот од пДНК

Производството на плазмидна ДНК (pDNA) зависи од генетската рекомбинација, што вклучува спојување на целната гена и другите елементи за формирање на коовалентно затворена циркуларна структура. Ферментацијата на висока густина на ћелии Escherichia coli и чистење се главните начини за производство на pDNA.

Развитокот на терапијата со ћелии и гени (CGT) и mRNA отворил нови можности за предспасување од епидемски болести и лечење на ретки болести. Индустријата за производство на CGT и mRNA бара висококвалитетна pDNA . Затоа, оптимизираната ферментација на Е. coli и високата добивка на pDNA се критични за ценовната ефикасност на вакцините/лековите на CGT и mRNA.

1. Растечката барања за pDNA

Според Извештајот за Производството на Плазмиден ДНК во САД, познатиот пазар на CGT сеочекува да расте од 7,2 милиарди долари во 2023 до 23,3 милиарди долари во 2028. Освен тоа, генетската терапија ќе стане dominantнa насока на CGT. Растечки број на CGT терapiи се додаваат за пазарен ланч, а повеќе pipeline-ovi влегуваат во клиничката фаза. Како резултат, барањето за pDNA расте со шок.

Од освен CGT терапиите, pDNA е основен сиров материјал за производството на mRNA вакцини. Со непрекинатата иновација на mRNA технологијата во домените на вакцините против заразни болести, кancer вакцините и лечењето на ретки болести, барањето за pDNA исто така ќе расте брзо.

2. Начини за подобрување на добивката на pDNA

Со зголемувањето на барањето за плазмиден ДНК, фокусот на развојот на тековната технологија е оптимизација на ферментациiskите стратегии за подобрување на добивката на пДНК. Клучните услови за развојот на горен строј вклучуваат компонентите на културниот средин, температурата, pH, дисолвиран кислород (DO), специфичен производен рат и стратегии на фед-батч.

Културен средин: Културниот средин за ферментација на Е. coli што се користи во производството на плазмиди обично е полу-синтетички средин. Тоа се состои од карбонски извори, азотни извори, неорганички соли и мрежни елементи. Од нив, видовите на карбонски и азотни извори се одлучителни за растењето на Е. coli и акумулацијата на продукти. Обични карбонски извори се глицозата и глицеролот, а азотните извори вклучуваат органички и неорганички азотни извори. Постојано, превисок карбон-азотен однос (C/N) може да забави растењето на бактериската раса, додека превисок C/N однос може да ја прибрза растењето, но да ограничи акумулацијата на продукти.

Температура : Оптималната температура за растење на Е. coli е 37°C. Поради тоа, низки температури (30-37°C) можат да се користат во батериска ферментација за да се намали максималниот специфичен рат на производство, што ја зголемува репликацијата на плазмидите. За плазмиди чувствителни на топлина, зголемувањето на температурата до 42°C може да го индуцира подвојувањето на бројот на копии на плазмидите.

pH : Оптималниот pH за растење на Е. coli е 7±0.2. pH-т на ферментацијата обично се одржуваше преку помпи со киселини и бази.

ДО : Критичниот опсег на дисолвиран кислород за Е. coli е 20%-30%. Недостаточен дисолвиран кислород може да доведе до преважно производство на етиден ацетат, што влијае врз растењето на бактериите и може да го предизвика автолизот на бактериите. Преважен дисолвиран кислород може да предизвика отровување со кислород. Фaktorите кои влијаат врз дисолвиран кислород вклучуваат брзина на мешање, брзина на аерација итн.

Стратегија на фуѓан батер : Фуѓаната батериска ферментација често се избира за производство на плазмиди. Прво, ова е полезно за постигнување на ферментација со висока густина на клетките од E. coli, што резултира во повеќе биомаса, која служи како основа за висок улог. Потоа, преважно брзото расти на Escherichia coli влијае врз стабилноста на плазмидите. Додавањето на ограничени nutrienti користејќи fed-batch може да контролира растворот на растечкиот темп рационално. Е. coli , па туку го зголемува улогот на плазмидите. Стратегијата DO-stat е обична за регулирање на fed-batch токму за време на ферментацијата на плазмидите. Има и истражувања што соопштуваат за можността на стратегијата pH-stat.

3. Услуги кои ги нуди Yaohai Bio-Pharma

Yaohai Bio-Pharma ја развија зрела платформа за производство на плазмиди. Понатаму, Yaohai Bio-Pharma оптимизирала основната културна средина, хранителната средина и стратегијата за контрола на ферментацијата. Во рамките на 30 часови од култивирање, улогот на плазмидите надминува 1g/L.

Поред тога, Yaohai Bio-Pharma може да овозможи оптимизација на процесот според методите на едина faktora или Design of Experiments (DoE) за различни плазмиди и гозобактерии. Целта на Yaohai Bio-Pharma е да задоволи барањата на клиентите за висок plasmid износ и квалитет.

Yaohai Bio-Pharma исто така активно трае институционални или индивидуални глобални партнери и нуди најконкурентните компензации во индустријата. Ако имате било кои прашања, слободно контактирајте: [email protected]