Процесот на производство на МРНК на eGFP

Производството на еГФП (Појачана Зелена Флуоресцентна Протеин) мРНК вклучува серија молекуларно-биолошки техники за генерирање на функционален РНК молекул што кодира за изразувањето на еГФП. Во областа на еГФП мРНК, Yaohai Bio-Pharma има накопан оброк на искуства во одговарање на специфичните потреби на клиентите. Со користење на нашите искуства, ја синтезиралиме процесната протеклот за производство на ЕГФП мРНК.

1. Клонирање на еГФП Ген : Да се добие генската секвенца што кодира за еГФП. Овој ген обично се клонира од предходно постојачки плазмид вектор или се синтетизира-artificially според познатата нуклеотидна секвенца. Клонираниот ген потоа се верификува преку секвенирање за да се осигура точност.
2. Оптимизација на Ген за Изразување : За оптимален израз во целниот систем (нпр., млекопиташки клетки, бактерии или витро транскрипциони системи), генот eGFP може да премине кроз оптимизација на кодоните. Ова вклучува замена на ретките кодони во оригиналната секвенца со повеќе често употребувани во домаќинската организам, зголемувајќи шансите за ефикасен превод.
3. Во vitro Приготовување на Транскрипциона Шаблон : След одбравањето на оптимизиран ген, тој се инкорпорира во одговарачек вектор, често плазмид, кој содржи регулаторски елементи неопходни за транскрипција (нпр., секвенца промотор). Овој плазмид служи како шаблон за витро транскрипција.
4. Во vitro Транскрипција : Користејќи го приготвените плазмиден шаблон, во vitro транскрипција се извршува за да се синтезира еGFP mRNA. Овој процес вклучува користење на RNA полимераза ензими, кои го препознаваат промоторниот низ и инициираат транскрипцијата, производејќи комплементарен RNA низ до DNA шаблонот. Според желаната апликација, mRNA може да биде капиран, полиаденилат и/или модифициран за да се зголеми стабилноста и ефикасноста на транслацијата.
5. Чишћење и Контрола на Квалитет : Синтетизираниот еGFP mRNA потоа се чисти за да се отстранат било кои загадувања, укључувајќи DNA, протеини и слободни нуклеотиди. Методите за чишћење можат да вклучат гел електрофореза, колона хроматографија или чишћење со честички. Последователно на чишћењето, mRNA се анализира по квалитет, укључувајќи концентрација, чистота и целост, користејќи техники како што се UV-Vis спектрофотометрија и гел електрофореза.
6. Чување и Достава : Пурифицираната еГФП мРНК обично се чува при ниски температури за да се одржи стабилноста. За експериментална употреба, мРНК може да се доставува во клетките користејќи различни методи, вклучувајќи електропорација, липофекција или вируски вектори, според специфичната апликација и типот на целна клетка.
7. Изразување и потврда : След што влезе во клетката, еГФП мРНК се транслира во зголемен зелен флуоресентен протеин, кој може да се види користејќи флуоресцентна микроскопија. Ова дозволува потврдата на успешното производство, достава и изразување на мРНК.

Со кратко, производството на еГФП мРНК вклучува клонирање на генот, оптимизирање за изразување, приготвување на темплат за ин vitro транскрипција, извршување на транскрипционата реакција, пурификација на резултиращата мРНК, и на крај доставање ја во клетките за изразување и потврда.

Така исто активно бареме глобални партнери од институции или индивидууми. Нудиме најконкурентниот компензација во индустријата. Ако имате било кои прашања, не се колебајте да се обидете да ни kontaktirate: [email protected]