Процес на производство на eGFP mRNA

Производството на mRNA на eGFP (Зајакнат зелен флуоресцентен протеин) вклучува низа техники на молекуларна биологија за генерирање на функционална РНК молекула која шифрира за изразување на eGFP. Во областа на eGFP mRNA, Yaohai Bio-Pharma има акумулирано долгогодишно искуство во угостителството за специфичните потреби на клиентите. Искористувајќи го нашето искуство, го синтетизиравме протокот на процесот за производство на EGFP mRNA.

1. Клонирање на генот eGFP: За да се добие генската секвенца што кодира за eGFP. Овој ген е типично клониран од веќе постоечки плазмиден вектор или синтетизиран вештачки врз основа на познатата нуклеотидна секвенца. Клонираниот ген потоа се проверува преку секвенционирање за да се обезбеди точност.
2. Генска оптимизација за изразување: За оптимална експресија во целниот систем (на пр., клетки на цицачи, бактерии или системи за транскрипција ин витро), генот eGFP може да биде подложен на оптимизација на кодон. Ова вклучува замена на ретките кодони во оригиналната низа со почесто користени во организмот домаќин, зголемувајќи ги шансите за ефикасно преведување.
3. In vitro Подготовка на шаблон за транскрипција: Штом оптимизираниот ген е подготвен, тој се инкорпорира во соодветен вектор, честопати плазмид, кој содржи регулаторни елементи неопходни за транскрипција (на пр. промоторна секвенца). Овој плазмид служи како шаблон за ин витро транскрипција.
4. In vitro транскрипција: Користејќи го подготвениот плазмиден шаблон, се врши ин витро транскрипција за да се синтетизира eGFP mRNA. Овој процес вклучува употреба на ензими на РНК полимераза, кои ја препознаваат промоторската секвенца и иницираат транскрипција, создавајќи комплементарна РНК влакно на шаблонот на ДНК. Во зависност од саканата апликација, mRNA може да биде покриена, полиаденилирана и/или модифицирана за да се подобри стабилноста и ефикасноста на транслацијата.
5. Прочистување и контрола на квалитетот: Синтетизираната mRNA на eGFP потоа се прочистува за да се отстранат сите загадувачи, вклучувајќи ДНК, протеини и слободни нуклеотиди. Методите на прочистување може да вклучуваат гел електрофореза, колона хроматографија или сепарација врз основа на монистра. По прочистувањето, mRNA се анализира за квалитет, вклучувајќи концентрација, чистота и интегритет, користејќи техники како што се UV-Vis спектрофотометрија и гел електрофореза.
6. Складирање и испорака: Прочистената mRNA на eGFP обично се складира на ниски температури за да се одржи стабилноста. За експериментална употреба, mRNA може да се доставува во клетките користејќи различни методи, вклучувајќи електропорација, липофекција или вирусни вектори, во зависност од специфичната апликација и типот на целната клетка.
7. Изразување и верификација: Откако ќе влезе во клетката, eGFP mRNA се преведува во засилениот зелен флуоресцентен протеин, кој може да се визуелизира со помош на флуоресцентна микроскопија. Ова овозможува верификација на успешното производство, испорака и изразување на mRNA.

Накратко, производството на mRNA на eGFP вклучува клонирање на генот, негово оптимизирање за изразување, подготовка на шаблон за транскрипција ин витро, изведување на реакцијата на транскрипција, прочистување на добиената mRNA и конечно доставување во клетките за изразување и верификација.

Исто така, активно бараме институционални или индивидуални глобални партнери. Ние нудиме најконкурентна компензација во индустријата. Ако имате какви било прашања, ве молиме слободно контактирајте не: CRO@yaohaibio.cn