mRNS integritás
Az mRNS integritáselemzés jelentősége
Az mRNS-eket inherens instabilitásuk miatt ismerik fel, és érzékenyek a fragmentálódásra külső tényezők jelenlétében, különösen az in vitro transzkripciós (IVT) és tisztítási folyamatok során, ahol a mindenütt jelenlévő nukleázok kihívást jelentenek. Az mRNS integritásának értékelése kulcsfontosságú az mRNS-alapú gyógyszerek későbbi fejlesztése során, amely biztosítja mind a biztonságot, mind a termék elérhetőségét.
A Yaohai-BioPharma átfogó mRNS-integritás-tesztelési szolgáltatásokat nyújt, olyan módszereket alkalmazva, mint az agaróz gélelektroforézis (AGE), a kapilláris elektroforézis (CEG) és a nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC), szigorú minőségi szabványok betartásával mind a kutatási, mind a klinikai vizsgálatok során.
Az mRNS integritására vonatkozó szabályozási követelmények
A WHO szabályozási megfontolásai szerint „az mRNS szerkezetének integritását az mRNS felszabadulásának kritikus minőségi jellemzőjének tekintik. Így ellenőrzésre van szükség az mRNS integritására, százalékos ép mRNS-re, százalékos mRNS-fragmensekre és így tovább.
Analitikai módszer
Elemzés |
Mód |
mRNS integritás |
AGE, Agarosegel elektroforézis |
CGE,Kapilláris elektroforézis |
CGE-LIF, Kapilláris gél elektroforézis fényindukált fluoreszcencia detektálással |
mRNS integritás agaróz gél elektroforézissel
Az agaróz gél elektroforézis egy széles körben alkalmazott technika a teljes RNS integritásának értékelésére. Ehhez az RNS-mintát etidium-bromiddal vagy SYBR Green-del megfestett denaturáló agaróz gélen futtatják. Az agarózból álló denaturáló gél elősegíti az RNS méret alapján történő elválasztását elektromos áram alkalmazásakor. Ahogy a negatív töltésű RNS a gél pozitív vége felé vándorol, a kisebb fragmensek gyorsabban mozognak, ami az RNS-molekulák méretalapú válogatását eredményezi.
mRNS integritás kapilláris gél elektroforézissel
A kapilláris gélelektroforézis (CGE) egy nagy felbontású analitikai megközelítés, amely kulcsfontosságú az RNS-molekulák integritásának hossz alapján történő mérésére. Ennek az értékelésnek van jelentősége a minőségbiztosítás, a hatékonyság megértése és a gyártási folyamatok optimalizálása szempontjából. Az agaróz gél elektroforézishez hasonlóan a CGE elektromos áramot használ az RNS-fragmensek töltésük és méretük alapján történő elkülönítésére. A CGE-ben egy kapillárist fluoreszcens festékkel infundált elválasztó gélmátrixszal töltenek meg. Az RNS mozgása a kapilláris mentén a méretétől függ, és a detektálás ultraibolya (UV) vagy fényindukált fluoreszcencia (LIF) detektorokkal történik.
EN
