Η κατάληψη θέσης Ν-γλυκοζυλίωσης είναι ένα φυσιολογικό χαρακτηριστικό των γλυκοπρωτεϊνών και παράγει κυρίως Ν-γλυκάνη. Η υπηρεσία ανάλυσης κατάληψης θέσης Ν-γλυκοζυλίωσης της Yaohai Bio-Pharma διεξάγεται μέσω πέψης, απελευθέρωσης, εμπλουτισμού και ανάλυσης χρησιμοποιώντας Υγρή Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας Ιονισμού Ηλεκτροψεκασμού-Φασματομετρία Μάζας (LC-ESI-MS/MS).
Έχουμε συμμετάσχει στον δομικό χαρακτηρισμό πρωτεϊνών διαφόρων μεγάλων μορίων, συμπεριλαμβανομένων των εμβολίων ανασυνδυασμένης υπομονάδας, των νανοσωμάτων/VHHs/ αντισωμάτων ενός τομέα (sdAbs), θραυσμάτων αντισωμάτων, ορμονών/πεπτιδίων, κυτοκινών, αυξητικών παραγόντων (GF), ενζύμων, και τα λοιπά.
Κανονιστικές Απαιτήσεις για Κατοχή θέσης Ν-γλυκοζυλίωσης
Σύμφωνα με την οδηγία ICH Q6B, «για τις γλυκοπρωτεΐνες, προσδιορίζεται η περιεκτικότητα σε υδατάνθρακες (ουδέτερα σάκχαρα, αμινοζάχαρα και σιαλικά οξέα). Επιπλέον, η δομή των αλυσίδων υδατάνθρακα, το μοτίβο των ολιγοσακχαριτών (το προφίλ κεραίας) και οι θέσεις γλυκοζυλίωσης της πολυπεπτιδικής αλυσίδας αναλύονται στον καλύτερο δυνατό βαθμό.»
Αναλυτική Μέθοδος
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Κατάληψη θέσης Ν-γλυκοζυλίωσης |
LC-MS μετά από πέψη με απογλυκοζυλάση και πρωτεάση |
Διαδικασίες
1. Πέψη πρωτεϊνών πρωτεϊνών για τη δημιουργία μικρών πεπτιδικών θραυσμάτων.
2. Η απελευθέρωση Ν-γλυκάνης με χρήση ενδογλυκοσιδάσης H ή PNGase F. Η ενδογλυκοσιδάση H διασπά τον δεσμό μεταξύ των δύο υπολειμμάτων GlcNAc στον πυρήνα των Ν-συνδεδεμένων γλυκανών, ενώ η PNGase F είναι μια γλυκοαμιδάση που διαχωρίζει τον δεσμό μεταξύ GlcNAc και Asn, απελευθερώνοντας ολόκληρο το αλυσίδα ζάχαρης και μετατροπή Asn σε Asp με αύξηση μάζας 1-Da.
3. Εμπλουτισμός Ν-γλυκοπεπτιδίου μέσω HILIC (Υγρή Χρωματογραφία Υδρόφιλης Αλληλεπίδρασης)
4. Ανάλυση της κατάληψης θέσης Ν-συνδεδεμένης γλυκοζυλίωσης χρησιμοποιώντας LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
