Η ανάλυση της θέσης Ν-γλυκοζυλίωσης είναι ζωτικής σημασίας για την κατανόηση των λειτουργιών των γλυκανών. Η Yaohai Bio-Pharma χρησιμοποιεί Υγρή Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας (LC-MS) μετά από ενζυματική διάσπαση για θέση Ν-γλυκοζυλίωσης.
Έχουμε συμμετάσχει στον δομικό χαρακτηρισμό πρωτεϊνών διαφόρων μεγάλων μορίων, συμπεριλαμβανομένων των εμβολίων ανασυνδυασμένης υπομονάδας, των νανοσωμάτων/VHHs/ αντισωμάτων ενός τομέα (sdAbs), θραυσμάτων αντισωμάτων, ορμονών/πεπτιδίων, κυτοκινών, αυξητικών παραγόντων (GF), ενζύμων, και τα λοιπά.
Κανονιστικές Απαιτήσεις για Θέση Ν-γλυκοζυλίωσης
Σύμφωνα με την οδηγία ICH Q6B, «για τις γλυκοπρωτεΐνες, προσδιορίζεται η περιεκτικότητα σε υδατάνθρακες (ουδέτερα σάκχαρα, αμινοζάχαρα και σιαλικά οξέα). Περαιτέρω, η δομή των αλυσίδων υδατάνθρακα, το σχέδιο ολιγοσακχαρίτη (προφίλ κεραίας) και οι θέσεις γλυκοζυλίωσης της πολυπεπτιδικής αλυσίδας αναλύονται στον καλύτερο δυνατό βαθμό.
Αναλυτική Μέθοδος
Ανάλυση |
Μέθοδοι |
Θέση Ν-γλυκοζυλίωσης |
Υγρή Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας (LC-MS) μετά από ενζυματική διάσπαση |
Διαδικασίες
1. Ενζυμική πέψη της πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας θρυψίνη ή άλλη πρωτεάση
2. Διαχωρίστε τα γλυκοπεπτίδια θραυσμάτων
3. Επιβεβαιώστε τη θέση Ν-γλυκοζυλίωσης με LC-MS
4. Αναλύστε δεδομένα