Ακεραιότητα mRNA
Η σημασία της ανάλυσης ακεραιότητας mRNA
Τα mRNAs αναγνωρίζονται για την εγγενή τους αστάθεια και είναι επιρρεπή σε κατακερματισμό παρουσία εξωτερικών παραγόντων, ιδιαίτερα κατά τη διάρκεια in vitro μεταγραφής (IVT) και διεργασιών καθαρισμού, όπου οι πανταχού παρούσες νουκλεάσες αποτελούν πρόκληση. Η αξιολόγηση της ακεραιότητας του mRNA είναι ζωτικής σημασίας για την επακόλουθη ανάπτυξη φαρμάκων που βασίζονται σε mRNA, διασφαλίζοντας τόσο την ασφάλεια όσο και τη διαθεσιμότητα του προϊόντος.
Η Yaohai-BioPharma παρέχει ολοκληρωμένες υπηρεσίες ελέγχου ακεραιότητας mRNA, χρησιμοποιώντας μεθόδους όπως ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης (AGE), τριχοειδή ηλεκτροφόρηση (CEG) και υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC), τηρώντας αυστηρά πρότυπα ποιότητας τόσο για ερευνητικές όσο και για κλινικές δοκιμές.
Ρυθμιστικές απαιτήσεις για την ακεραιότητα του mRNA
Σύμφωνα με τις κανονιστικές εκτιμήσεις του ΠΟΥ, «η ακεραιότητα της δομής του mRNA θεωρείται κρίσιμο χαρακτηριστικό ποιότητας για την απελευθέρωση του mRNA. Επομένως, απαιτείται έλεγχος για την ακεραιότητα του mRNA, το ποσοστό άθικτου mRNA, το ποσοστό των θραυσμάτων mRNA και ούτω καθεξής."
Αναλυτική Μέθοδος
Ανάλυση |
Μέθοδοι |
ακεραιότητα mRNA |
AGE, Agarosegel ηλεκτροφόρηση |
CGE,Τριχοειδής ηλεκτροφόρηση |
CGE-LIF, Ηλεκτροφόρηση τριχοειδούς γέλης με ανίχνευση φθορισμού που προκαλείται από το φως |
Ακεραιότητα mRNA από ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης
Η ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη τεχνική για την αξιολόγηση της ακεραιότητας του ολικού RNA. Αυτό περιλαμβάνει τη διεξαγωγή του δείγματος RNA σε μια μετουσιωτική γέλη αγαρόζης, χρωματισμένη είτε με βρωμιούχο αιθίδιο είτε με SYBR Green. Το μετουσιωτικό πήκτωμα, που αποτελείται από αγαρόζη, διευκολύνει τον διαχωρισμό του RNA με βάση το μέγεθος όταν εφαρμόζεται ηλεκτρικό ρεύμα. Καθώς το αρνητικά φορτισμένο RNA μεταναστεύει προς το θετικό άκρο της γέλης, τα μικρότερα θραύσματα κινούνται πιο γρήγορα, με αποτέλεσμα μια ταξινόμηση με βάση το μέγεθος των μορίων RNA.
Ακεραιότητα mRNA με ηλεκτροφόρηση τριχοειδούς γέλης
Η ηλεκτροφόρηση τριχοειδούς πηκτής (CGE) αποτελεί μια αναλυτική προσέγγιση υψηλής ανάλυσης καθοριστική για τη μέτρηση της ακεραιότητας των μορίων RNA κατά μήκος. Αυτή η αξιολόγηση έχει σημασία για τη διασφάλιση ποιότητας, την κατανόηση της ισχύος και τη βελτιστοποίηση των διαδικασιών παραγωγής. Παρόμοια με την ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης, το CGE χρησιμοποιεί ηλεκτρικό ρεύμα για να διαχωρίσει θραύσματα RNA με βάση το φορτίο και το μέγεθός τους. Στο CGE, ένα τριχοειδές γεμίζεται με μια μήτρα διαχωρισμού γέλης που εγχέεται με μια φθορίζουσα βαφή. Η κίνηση του RNA κατά μήκος του τριχοειδούς εξαρτάται από το μέγεθός του και η ανίχνευση επιτυγχάνεται χρησιμοποιώντας ανιχνευτές φθορισμού υπεριώδους (UV) ή φωτός (LIF).
EN
