Η κάλυψη του 5'-άκρου είναι μια ουσιαστική τροποποίηση του mRNA. Τα mRNA με δομές καπακιού, ειδικά δομές Cap1, διευκολύνουν τα mRNA να αποφεύγουν τις έμφυτες ανοσοαποκρίσεις in vivo, με αποτέλεσμα την αποτελεσματική μετάφραση πρωτεΐνης.
Η ενζυματική κάλυψη (η μέθοδος δύο σταδίων) είναι η συμβατική μέθοδος κάλυψης mRNA, παρόμοια με τη διαδικασία κάλυψης σε ευκαρυωτικούς οργανισμούς. Κάτω από τη δράση μιας σειράς ενζύμων, η 7-μεθυλγουανίνη (m7G) συνδέεται με το 5'-άκρο του mRNA μέσω ενός δεσμού τριφωσφορικού 5'-5' και υφίσταται τροποποίηση μεθυλίωσης για να σχηματίσει τη δομή καλύμματος Cap 1 (m7GpppN).
Διάγραμμα σχηματισμού φυσικής δομής καπακιού
Η ροή της ενζυματικής αντίδρασης κάλυψης έχει ως εξής:
Το γραμμικοποιημένο πλασμιδικό DNA χρησιμοποιείται ως πρότυπο για in vitro μεταγραφή (IVT) παρουσία πολυμεράσης Τ7 και mRNA με δομή τελικού καλύμματος 5' σχηματίζεται μετά από καθαρισμό ενός σταδίου χρησιμοποιώντας το ένζυμο κάλυψης δαμαλίτιδας και 2'-Ο -μεθυλοτρανσφεράση.
Στοιχεία υπηρεσιών
Προαιρετική εξυπηρέτηση |
Λεπτομέρειες υπηρεσιών |
Περίοδος παράδοσης (Ημέρα) |
mRNA ενζυματική κάλυψη |
Ενζυματική αντίδραση κάλυψης |
1 |
Βελτιστοποίηση αντίδρασης κάλυψης - προαιρετικό |
Σχεδιασμός και βελτιστοποίηση στοιχείων αντίδρασης |
3 7 ~ |
Τα χαρακτηριστικά μας
- Σχεδιασμός και βελτιστοποίηση του συστατικού της αντίδρασης κάλυψης
Το συστατικό της αντίδρασης κάλυψης βελτιστοποιείται και η παραγωγή μεταγραφής mRNA αυξάνεται σημαντικά.
- Επαλήθευση έκφρασης in vitro
Το καλυμμένο mRNA διαμολύνεται σε κύτταρα 293Τ και μπορεί να ανιχνευθεί η έκφραση της πρωτεΐνης στόχου.
- Αυστηρός έλεγχος της RNase
Μέσω του αυστηρού ελέγχου του πειραματικού περιβάλλοντος και των αναλωσίμων RNaseson, η αποικοδόμηση του mRNA αποτρέπεται αποτελεσματικά.
Μελέτη περίπτωσης
Η πλατφόρμα mRNA της Yaohai Bio-Pharma έχει δημιουργήσει μια τέλεια διαδικασία αντίδρασης κάλυψης.
Για το mRNA eGFP, ένα προ-προϊόν mRNA που παρασκευάζεται με ενζυματική κάλυψη, μπορεί να παρατηρηθεί ένα σήμα φθορισμού eGFP (πράσινος φθορισμός) σε υψηλό επίπεδο μετά τη διαμόλυνση 293Τ κυττάρων για 24 ώρες, το οποίο ανιχνεύεται με Western Blot (WB), που δείχνει ότι το Η πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη ενισχυμένη με πρωτεΐνη-στόχο (eGFP) μπορεί να εκφραστεί αποτελεσματικά in vitro.
Έκφραση του mRNA ενζυματικού καλυμμένου eGFP σε κύτταρο 293Τ
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
