Προσαρμοσμένη σύνθεση saRNA
Το αυτοενισχυόμενο mRNA (saRNA), γνωστό και ως ρεπλικόνιο RNA, κωδικοποιεί in vitro αλληλουχίες mRNA μεταγραφής (IVT) και ιικά γονίδια ρεπλικάσης που προέρχονται από αλφαϊούς ή φλαβοϊούς. Τα γονίδια ιικής ρεπλικάσης επιτρέπουν την αυτοενίσχυση του mRNA, που έχει ως αποτέλεσμα αυξημένη έκφραση πρωτεΐνης και ελάχιστη απαιτούμενη δόση RNA σε σύγκριση με τα μη ενισχυτικά mRNA. Μια άλλη πτυχή είναι ότι το saRNA είναι ένα σχετικά μεγάλο μόριο (πάνω από 14 kb).
Η Yaohai Bio-Pharma έχει δημιουργήσει ένα σύνολο τεχνολογιών σύνθεσης mRNA για την παροχή μη ενισχυτικού mRNA και αυτοενισχυόμενου mRNA (1000 nt~14000 nt), όπως σχεδιασμός και βελτιστοποίηση αλληλουχίας, IVT, καθαρισμός, λυοφιλοποίηση και ενθυλάκωση λιπιδικών νανοσωματιδίων (LNP). . Όλα τα προϊόντα κυκλοφορούν σύμφωνα με αυστηρά πρότυπα ποιοτικού ελέγχου.
Εικ.1 Δομικά χαρακτηριστικά των IVT mRNAs: Συμβατικό, κυκλικό και αυτοενισχυόμενο mRNA.
Χαρακτηριστικά αλληλουχίας αυτοενισχυόμενου mRNA
Το αυτοενισχυόμενο RNA περιλαμβάνει τέσσερις μη δομικές πρωτεΐνες (που ορίζονται ως nsP1, nsP2, nsP3 και nsP4), οι οποίες προέρχονται από αλφαϊούς, τον ιό της εγκεφαλίτιδας των ίππων της Βενεζουέλας (VEEV). Μεταξύ αυτών, το nsP1 εμφανίζει διπλές ενζυματικές δραστηριότητες, συγκεκριμένα GTase και N7MTase, ενώ το nsP2 διαθέτει δραστηριότητα RTPase, καθοριστικής σημασίας για την κάλυψη του mRNA IVT για τη δημιουργία δομής Cap 0. Επιπλέον, η nsP2 χρησιμεύει ως πρωτεάση και ελικάση, διευκολύνοντας την περίπλοκη επεξεργασία ολόκληρου του συμπλέγματος nsP. Η ακριβής λειτουργία του nsP3 παραμένει αδιευκρίνιστη, ωστόσο εμπλέκεται σε αλληλεπιδράσεις με διαφορετικές πρωτεΐνες κυττάρου ξενιστή, συμβάλλοντας έτσι στην εξασθένηση της αντι-ιικής απόκρισης που δημιουργείται από τον ξενιστή.
Μια περιοχή υπογονιδιωματικού προαγωγέα αλφαϊού (SGP) βρίσκεται πριν από το γονίδιο ενδιαφέροντος (GOI). Το στοιχείο SGP διευκολύνει την έναρξη της μεταγραφής GOI παρακάμπτοντας την ανάγνωση της αλληλουχίας που κωδικοποιεί τις ιικές πρωτεΐνες nsP.
Εικ.2 Σύνθεση και κυτταρικές δοκιμασίες του eGFP saRNA της πλατφόρμας Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Προσαρμοσμένες λύσεις saRNA
Το πρωτόκολλο σύνθεσης του saRNA είναι παρόμοιο με το mRNA: Προσαρμοσμένη σύνθεση mRNA
- Σχεδιασμός ακολουθιών
- Παρασκευή προτύπου πλασμιδίου
- in vitro μεταγραφή (IVT)
- Ενζυματική κάλυψη mRNA
- Κάλυψη συν-μεταγραφής mRNA
- Καθαρισμός mRNA
- Λυοφιλοποίηση mRNA
- Ενθυλάκωση LNP
- Ανάλυση και Δοκιμή
EL
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
