Το κυκλικό mRNA (circRNA) έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στη μελέτη γονιδιακών ή πρωτεϊνικών λειτουργιών. Εν τω μεταξύ, είναι δημοφιλές στην ανάπτυξη προφυλακτικών και θεραπευτικών βιολογικών, παρόμοιων με το mRNA.
Η Yaohai Bio-Pharma έχει δημιουργήσει ένα σύνολο τεχνολογιών σύνθεσης circRNA για την παροχή RNA υψηλής ποιότητας, όπως σχεδιασμό και βελτιστοποίηση αλληλουχίας, in vitro μεταγραφή (IVT), κυκλοποίηση/κυκλοποίηση, καθαρισμό και ενθυλάκωση λιπιδικών νανοσωματιδίων (LNP). Όλα τα προϊόντα κυκλοφορούν σύμφωνα με τα αυστηρά πρότυπα ποιοτικού ελέγχου (QC).
Σε σύγκριση με το γραμμικό mRNA, το κυκλικό RNA (circRNA) είναι πιο σταθερό στη δομή και είναι ένα σημαντικό καυτό σημείο στην τρέχουσα έρευνα για φάρμακα νουκλεϊκών οξέων. Έχει ένα ευρύ φάσμα εφαρμογών σε διαφορετικούς τομείς, είτε ως κωδικοποιητικό circRNA είτε ως μη κωδικοποιητικό circRNA, συμπεριλαμβανομένων προφυλακτικών εμβολίων για μολυσματικές ασθένειες, θεραπευτικών ογκολογικών εμβολίων, θεραπευτικών ογκολογικών φαρμάκων, θεραπείας υποκατάστασης πρωτεϊνών, αναγεννητικής ιατρικής, κυτταρικής και γονιδιακής θεραπείας (CGT) , ρόλος μοριακού σπόγγου και απταμερές RNA.
Διαδικασία | Προαιρετική εξυπηρέτηση | Λεπτομέρειες υπηρεσιών | Περίοδος παράδοσης (ημέρα) |
Σχεδιασμός και Βελτιστοποίηση Ακολουθιών circRNA | Σχεδιασμός και Βελτιστοποίηση Ακολουθιών Κωδικοποίησης | Βελτιστοποίηση κωδικονίων CDS | 1 |
Σχεδιασμός και Βελτιστοποίηση Μη Κωδικοποιητικών Ακολουθιών | Αλληλουχία ιντρονίων και εξονίων, Σχεδίαση και βελτιστοποίηση ομόλογου βραχίονα και διαχωριστή | 1-2 | |
Κυκλική Παρασκευή πλασμιδίου | Γονιδιακή Σύνθεση | Gene Synthesis (τρίτου μέρους) | 7-10 |
Ενίσχυση πλασμιδίου | Ενίσχυση πλασμιδίου | 2 | |
Εκχύλιση πλασμιδίου | |||
Γραμμικοποιημένο παρασκεύασμα πλασμιδίου | Γραμμικοποίηση και Καθαρισμός Πλασμιδίου | Γραμμικοποίηση πλασμιδίου | 1 |
Γραμμικοποίηση Καθαρισμός DNA | |||
In vitro Μεταγραφή και Κυκλοποίηση | In vitro Μεταγραφή και Κυκλοποίηση | Αντιδράσεις μεταγραφής και κυκλοποίησης in vitro | 1-2 |
Πέψη RNase R | |||
Βελτιστοποίηση-προαιρετικό | Σύνθεση Αντίδρασης, Βελτιστοποίηση Χρόνου | 2-5 | |
Καθαρισμός circRNA | Συμβατική μέθοδος καθαρισμού | Κατακρήμνιση χλωριούχου λιθίου | 1 |
Καθαρισμός με μαγνητικά σφαιρίδια | 1 | ||
Καθαρισμός circRNA υψηλής καθαρότητας | Προπαρασκευαστική Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης (HPLC) | 1-2 | |
Ανταλλαγή buffer | Υπερδιήθηση | 1 | |
Λυοφιλοποίηση circRNA | Γέμισμα δείγματος | Πλήρωση | 2-3 |
Λυοφιλοποίηση | Προκατάψυξη | ||
Πρωτογενής ξήρανση (εξάχνωση) | |||
Δευτερεύουσα ξήρανση (εκρόφηση) | |||
Ενθυλάκωση circRNA-LNP | Ενθυλάκωση LNP | Προεπεξεργασία Υλικών και Υγρών | 2 |
Microfluidic Device Mixing | |||
Ανταλλαγή buffer | Διήθηση εφαπτομενικής ροής | 1 | |
αποστειρωμένο | Διήθηση | ||
Ποιοτικός Έλεγχος Πλασμιδικού DNA | Συγκέντρωση/καθαρότητα | Φασματοφωτομετρία υπεριώδους (UV). | 1-2 |
Διαμόρφωση πλασμιδίου | Ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης (AGE) | ||
Τριχοειδής Ηλεκτροφόρηση (CE)-Προαιρετικό | |||
Ταυτοποίηση πλασμιδίου | Αναγνώριση ενζύμου περιορισμού/AGE | ||
Ποιοτικός Έλεγχος του circRNA | Συγκέντρωση/καθαρότητα | Φασματοφωτομετρία υπεριώδους (UV). | - |
Καθαρότητα | Ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-προαιρετικό | 1 | ||
Ποιοτικός Έλεγχος circRNA-LNP | Αποτελεσματικότητα ενθυλάκωσης | Μέθοδος RiboGreen | 1 |
Μέγεθος σωματιδίου | Δυναμική σκέδαση φωτός (DLS) | 1 | |
Δείκτης πολυδιασποράς | Δυναμική σκέδαση φωτός (DLS) | 1 | |
Δυνατότητα Ζέτα | Δυναμική σκέδαση φωτός (DLS) | 1 | |
Δοκιμασία ισχύος με βάση τα κύτταρα | Μεταμόλυνση Κυττάρου | Επιμετάλλωση κυττάρων, επιμόλυνση κυττάρων | 4 |
Ανίχνευση πρωτεΐνης στόχου | Παρατήρηση φθορισμού, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Επιμολύναμε ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, λουσιφεράση circRNA σε κύτταρα 293T και ανιχνεύσαμε την πρωτεΐνη-στόχο μέσω σήματος φθορισμού, φωταύγειας ή χρώματος, western blot (WB), ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA).
Δοκιμασίες ισχύος με βάση τα κύτταρα των δειγμάτων circRNA από την Yaohai Bio-Pharma