Όλες οι κατηγορίες
ENEN
Δοκιμασίες ισχύος που βασίζονται σε κύτταρα

Δοκιμασίες ισχύος που βασίζονται σε κύτταρα

Αρχική >  IVT RNA  >  Ανάλυση και Δοκιμή mRNA  >  Δοκιμασίες ισχύος που βασίζονται σε κύτταρα

IVT RNA

Δοκιμασίες ισχύος που βασίζονται σε κύτταρα

Η σημασία του προσδιορισμού ισχύος του mRNA

Με την ταχεία ανάπτυξη των εμβολίων mRNA και των θεραπευτικών ουσιών, απαιτείται μια ειδική ομάδα μεθόδων ανάλυσης για τον έλεγχο της ισχύος (καθορίζοντας τη βιολογική τους δράση), που περιλαμβάνει τη μεταφραστική αποτελεσματικότητα του mRNA. Αυτές οι μέθοδοι βασίζονται τυπικά σε κυτταρική επιμόλυνση και λειτουργικές δοκιμασίες της πρωτεΐνης στόχου.

Η Yaohai Bio-Pharma προσφέρει δοκιμές ισχύος βασισμένες σε κύτταρα για φαρμακευτικές ουσίες mRNA ή προϊόντα LNP, συμπεριλαμβανομένων κυτταρικών επιμολύνσεων (293T, HepG2, HeLa, κύτταρα K562, U937, Raw264.7, κ.λπ.) και δοκιμές ELISA ή Western Blotting (WB).

Κανονιστικές απαιτήσεις για δοκιμές ισχύος

Σύμφωνα με τις κανονιστικές εκτιμήσεις του ΠΟΥ, «Η ισχύς κάθε παρτίδας του τελικού εμβολίου θα πρέπει να προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας μια κατάλληλη ποσοτική και επικυρωμένη λειτουργική μέθοδο(ες). Οι πιθανοί in vitro προσδιορισμοί ισχύος μπορεί να περιλαμβάνουν συστήματα επιμόλυνσης που βασίζονται σε κύτταρα ή προσδιορισμούς χωρίς κύτταρα». Και το USP συνέστησε μια «δοκιμή με βάση τα κύτταρα» για να ελεγχθεί η ισχύς του mRNA, δηλαδή η έκφραση της πρωτεΐνης στόχου.

Αναλυτική Μέθοδος

Ανάλυση

Μέθοδοι

Δοκιμασίες Ισχύος

Η κυτταρική επιμόλυνση και η πρωτεΐνη στόχος προσδιορίζουν:

293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 κύτταρα κ.λπ.
Διαδικασία

Βήμα 1. Επιμόλυνση με βάση τα κύτταρα με mRNA ή mRNA-LNP

Τα κύτταρα καλλιεργούνται και διαμολύνονται με mRNA ή mRNA-LNP. Αναλυτικά, το mRNA διαμολύνεται αφού αναμιχθεί με ένα αντιδραστήριο επιμόλυνσης, ενώ το mRNA-LNP διαμολύνεται απευθείας στα κύτταρα. Μετά από 24-48 ώρες, διαυγάστε το υπερκείμενο που περιέχει την εκφρασμένη πρωτεΐνη με φυγοκέντρηση.

Βήμα 2. Λειτουργικές δοκιμασίες της πρωτεΐνης στόχου

Εκτελέστε αναλύσεις ELISA ή WB για να αξιολογήσετε τη λειτουργική δέσμευση των πρωτεϊνών-στόχων.

Case Study

Δοκιμασίες ισχύος δειγμάτων mRNA που βασίζονται σε κύτταρα

Η Yaohai-BioPharma έχει αναπτύξει μέθοδο προσδιορισμού ισχύος με βάση τα κύτταρα για mRNA, που περιλαμβάνει κυτταρική καλλιέργεια, κυτταρική επιμόλυνση και λειτουργικές δοκιμασίες πρωτεΐνης. Επιμολύναμε mRNA eGFP, mRNA mCherry, mRNA λουσιφεράσης, mRNA πρωτεΐνης ακίδας σε κύτταρα 293Τ και ανιχνεύσαμε την πρωτεΐνη στόχο μέσω σήματος φθορισμού, φωταύγειας ή έγχρωμου σήματος, WB, ELISA.

5

Δοκιμασίες ισχύος προϊόντων mRNA με βάση τα κύτταρα από την Yaohai Bio-Pharma

Πάρτε ένα δωρεάν παράθεση

Ελάτε σε επαφή