LNP Λιπιδική Σύνθεση Προσδιορισμός και Ποσότητα
Η σημασία της ανάλυσης λιπιδικής σύνθεσης LNP
Τα νανοσωματίδια λιπιδίων (LNPs), που περιλαμβάνουν κατιονικό λιπίδιο, χοληστερόλη, φωσφολιπίδιο και συζευγμένο με PEG λιπίδιο, χρησιμεύουν ως εξέχοντα συστήματα χορήγησης για τα φαρμακευτικά προϊόντα mRNA. Η σταθερότητα και η ρευστότητα διπλής στιβάδας των LNPs εξαρτώνται από τις ιδιότητες και τα περιεχόμενα των διαφόρων λιπιδίων που χρησιμοποιούνται στο σύστημα σύνθεσης. Η σύνθεση των λιπιδίων είναι πολύ σημαντική για το πόσο καλά τα LNP παρέχουν φάρμακα.
Η Yaohai-BioPharma παρέχει λύσεις για τον προσδιορισμό και τον ποσοτικό προσδιορισμό της λιπιδικής σύνθεσης mRNA-LNP χρησιμοποιώντας την υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης με τη μέθοδο ανίχνευσης φορτισμένου αερολύματος (HPLC-CAD).
Ρυθμιστικές απαιτήσεις για τη λιπιδική σύνθεση
Σύμφωνα με τις κανονιστικές εκτιμήσεις του ΠΟΥ, «Η τελική σύνθεση του εμβολίου, συμπεριλαμβανομένων των λιπιδίων, θα πρέπει να περιγράφεται μαζί με την ποσότητα των συστατικών σε κάθε παρουσίαση».
Αναλυτική Μέθοδος
Ανάλυση |
Μέθοδοι |
Λιπιδική Σύνθεση |
HPLC σε συνδυασμό με Corona Charged Aerosol Detector (CAD) |
Διαδικασία
Βήμα 1. Προετοιμασία δείγματος λιπιδίων
Η επιλογή του αραιωτικού είναι υψίστης σημασίας για την ανάλυση των λιπιδικών συστατικών στα φαρμακευτικά προϊόντα mRNA-LNP. Το αραιωτικό θα πρέπει να διαλύει αποτελεσματικά κάθε λιπιδικό συστατικό και να διαταράσσει τυχόν αλληλεπιδράσεις μεταξύ λιπιδίων και ενθυλακωμένου mRNA. Τα πιθανά αραιωτικά περιλαμβάνουν αιθανόλη, αιθανόλη/διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO), αιθανόλη/φορμαμίδιο, αιθανόλη/οξική τριαιθυλαμίνη και άλλα.
Βήμα 2. HPLC-CAD
Η υγρή χρωματογραφία αντίστροφης φάσης (RP-HPLC) σε συνδυασμό με έναν ανιχνευτή φορτισμένου αερολύματος (CAD) έχει ενσωματωθεί στη δοκιμή σύνθεσης λιπιδίων LNP. Δεδομένου ότι τα λιπίδια στερούνται χρωμοφόρων και δεν απορροφούν την υπεριώδη ακτινοβολία (UV) χωρίς παραγωγοποίηση, η εξάτμιση είναι τυπικά πρόκληση. Το CAD, όντας πιο ευαίσθητο, μπορεί να διακρίνει ένα ευρύτερο φάσμα περιεκτικότητας σε λιπίδια. Προηγουμένως, μια υγρή χρωματογραφία υπερυψηλής απόδοσης (UHPLC) σε συνδυασμό με μια μέθοδο ανιχνευτή φορτισμένου αερολύματος (CAD) διαμορφώθηκε και εφαρμόστηκε σε ανάλυση λιπιδίων για μελέτες LNP μικρών παρεμβαλλόμενων RNA (siRNA).
Βήμα 3. Ανάλυση δεδομένων
Η ποσότητα κάθε λιπιδίου εντός του δείγματος περιελάμβανε υπολογισμούς που προέκυψαν από την τυπική καμπύλη πολλαπλασιαζόμενη με τον παράγοντα αραίωσης. Αυτή η διαδικασία έδωσε την περιεκτικότητα σε λιπίδια για κάθε συστατικό εντός του δείγματος mRNA-LNP.
Περίπτωση ανάλυσης λιπιδικής σύνθεσης LNP με HPLC-CAD
Με βάση το HPLC-CAD, η Yaohai-BioPharma έχει αναπτύξει μια ισχυρή μέθοδο για την ανάλυση των λιπιδικών συστατικών του mRNA-LNP. Αυτή η μέθοδος επικυρώθηκε ότι είναι γραμμική, επαναλαμβανόμενη, ακριβής, ακριβής και ειδική για σκευάσματα LNP, τα οποία θα μπορούσαν να υποστηρίξουν την ανάπτυξη διεργασιών, την ανάπτυξη σκευασμάτων, τη δοκιμή σταθερότητας και την απελευθέρωση mRNA-LNP.
Χρωματογραφικό προφίλ 4 λιπιδίων με τη μέθοδο HPLC-CAD της Yaohai-BioPharma
Η γραμμικότητα της μεθόδου HPLC-CAD της Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
EN
