Οι ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες συχνά βλέπουν την οξείδωση εκτεθειμένων πλευρικών αλυσίδων αμινοξέων, όπως η τρυπτοφάνη (Trp) και η μεθειονίνη (Met), αλλάζοντας τις φυσικοχημικές ιδιότητες των πρωτεϊνών. Αυτές οι αλλαγές μπορεί με τη σειρά τους να συμβάλλουν στην αλλαγή των βιολογικών λειτουργιών των προσβεβλημένων πρωτεϊνών, όπως απώλεια δέσμευσης, μείωση της ενζυμικής δραστηριότητας, απροσδόκητα γρήγορη κάθαρση. Οι πρωτεΐνες είναι σημαντικοί στόχοι για οξειδωτικές αντιδράσεις επειδή αντιδρούν γρήγορα με οξειδωτικά και είναι άφθονα στα κύτταρα, στους εξωκυτταρικούς ιστούς και στα σωματικά υγρά.
Ως εκ τούτου, η παρακολούθηση της οξείδωσης των πρωτεϊνών είναι κρίσιμη για την επιτυχή βιοφαρμακευτική ανάπτυξη.
Η Yaohai Bio-Pharma προσφέρει υπηρεσία ανάλυσης οξείδωσης αμινοξέων, η οποία σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την οξείδωση αμινοξέων με Υγρή Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας (LC-MS).
Έχουμε συμμετάσχει στον δομικό χαρακτηρισμό πρωτεϊνών διαφόρων μεγάλων μορίων, συμπεριλαμβανομένων των εμβολίων ανασυνδυασμένης υπομονάδας, των νανοσωμάτων/ VHHs/ αντισωμάτων ενός τομέα (sdAbs), θραυσμάτων αντισωμάτων, ορμονών/πεπτιδίων, κυτοκινών, αυξητικών παραγόντων (GF), ενζύμων, και τα λοιπά.
Ρυθμιστικές απαιτήσεις για την οξείδωση αμινοξέων
Σύμφωνα με τις οδηγίες του ICH Q6B, οι οξειδωμένες μορφές μπορούν να ανιχνευθούν και να χαρακτηριστούν με χρωματογραφικές, ηλεκτροφορητικές και/ή άλλες σχετικές αναλυτικές μεθόδους (π.χ. Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης (HPLC), ηλεκτροφόρηση τριχοειδών, φασματοσκοπία μάζας, κυκλικός διχρωμισμός).
Αναλυτικές μέθοδοι
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Οξείδωση αμινοξέων |
LC-MS, Υγρή Χρωματογραφία Αντίστροφης Φάσης Υψηλής Απόδοσης (RP-HPLC) ή Υδροφοβική Χρωματογραφία Αλληλεπίδρασης Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης (HIC-HPLC) και φασματομετρία μάζας |
Αναλυτικές Διαδικασίες
1. Προετοιμασία δείγματος
2. LC-MS
3. Ανάλυση δεδομένων
Τα υπολείμματα τρυπτοφάνης (Trp) είναι ιδιαίτερα επιρρεπή σε οξείδωση λόγω της υψηλής αντιδραστικότητας της αρωματικής ινδόλης με αντιδραστικά είδη οξυγόνου. Η οξείδωση Trp απαιτεί κάποια έκθεση των υπολειμμάτων Trp που κανονικά είναι θαμμένα στην τρισδιάστατη δομή της πρωτεΐνης.
Ωστόσο, όταν τα υπολείμματα Trp οξειδώνονται, μπορούν να μετατραπούν σε μια ποικιλία προϊόντων με πολύ διαφορετικές ιδιότητες από το αρχικό Trp. Η πιο κοινή οδός για την οξείδωση της Trp περιλαμβάνει το σχηματισμό Ν-φορμυλοκινουρενίνης (Διαφορά μάζας: +32).
Ένα άλλο συχνά οξειδωμένο αμινοξύ είναι η μεθειονίνη. Το άτομο θείου στο υπόλειμμα Met μπορεί να δεχτεί είτε ένα είτε δύο άτομα οξυγόνου που οδηγούν στον σχηματισμό σουλφοξειδίου (Διαφορά μάζας: +16) ή σουλφόνης (Διαφορά μάζας: +32), αντίστοιχα. Αυτή η τροποποίηση είναι σχετικά κοινή λόγω της τυπικά υψηλής επιφανειακής έκθεσης του Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
