Η αποαμίδωση των πλευρικών αλυσίδων γλουταμίνης και ασπαραγίνης είναι μια κοινή τροποποίηση όσον αφορά την επίδραση στις ιδιότητες των πρωτεϊνικών βιοφαρμακευτικών προϊόντων. Η αποαμίδωση μπορεί να συμβεί στα υπολείμματα γλουταμίνης, αλλά συνήθως με πολύ χαμηλότερο ρυθμό. Οι ρυθμοί αποαμίδωσης επηρεάζονται από τη θερμοκρασία, το pH, τη δομή της τοπικής πρωτεΐνης και τα πλευρικά υπολείμματα αμινοακυλίου.
Η Yaohai BioPharma προσφέρει υπηρεσία δοκιμής αποαμίδωσης αμινοξέων, η οποία σας επιτρέπει να ανιχνεύετε την αποαμίδωση αμινοξέων με Υγρή Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας (LC-MS).
Έχουμε συμμετάσχει στον δομικό χαρακτηρισμό πρωτεϊνών διαφόρων μεγάλων μορίων, συμπεριλαμβανομένων των εμβολίων ανασυνδυασμένης υπομονάδας, των νανοσωμάτων/VHHs/ αντισωμάτων ενός τομέα (sdAbs), θραυσμάτων αντισωμάτων, ορμονών/πεπτιδίων, κυτοκινών, αυξητικών παραγόντων (CF), ενζύμων, και τα λοιπά.
Κανονιστικές απαιτήσεις για την αποαμίδωση αμινοξέων
Σύμφωνα με τις οδηγίες του ICH Q6B, οι απαμιδωμένες μορφές μπορούν να ανιχνευθούν και να χαρακτηριστούν με χρωματογραφικές, ηλεκτροφορητικές και/ή άλλες σχετικές αναλυτικές μεθόδους.
Αναλυτικές μέθοδοι
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Αποαμιδοποίηση |
Υγρή Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας (LC-MS) |
Διαδικασίες
π.χ. ασπαρτική αποαμίδωση
1. Ενζυματική πέψη
2. LC-MS υπό την κατάσταση Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Απόδοσης (HPLC)
3. Ανάλυση δεδομένων
Η αποαμίδωση της ασπαραγίνης λαμβάνει χώρα μέσω ενός ενδιάμεσου ηλεκτριμιδίου (Suc), το οποίο είναι ευαίσθητο σε ρακεμοποίηση και υδρόλυση, αποδίδοντας τέσσερα ισομερή Asp, συμπεριλαμβανομένων των L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp και D-IsoAsp.
Θεωρητικά, η αποαμίδωση Gln θα μπορούσε να δημιουργήσει τέσσερα αντίστοιχα ισομερή Glu μέσω μιας διαδικασίας παρόμοιας με την απαμίδωση Asn.
Η φασματομετρία μάζας υψηλής ανάλυσης προσδιορίζει εύκολα τη διαφορά μάζας 1-Da μεταξύ πεπτιδίων που περιέχουν Asn/Gln και των αντίστοιχων αποαμιδιωμένων ομολόγων τους Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
