Οι αναπαράγωντες πρωτεΐνες συχνά υφίστανται οξείδωση των εκτεθειμένων πλευρών των αξονικών ομάδων, όπως του τρύπτοφαν (Trp) και του μεθιονιν (Met), αλλάζοντας τις φυσικοχημικές ιδιότητες των πρωτεϊνών. Αυτές οι αλλαγές μπορεί να επηρεάσουν τις βιολογικές λειτουργίες των επηρεασμένων πρωτεϊνών, όπως η απώλεια δεσμού, η μείωση της ζυμωδικής δραστηριότητας, η απροσδόκητη γρήγορη εξάλειψη. Οι πρωτεΐνες είναι σημαντικά στόχα για οξειδωτικές αντιδράσεις, καθώς αντιδρούν γρήγορα με τα οξειδωτικά και είναι πλούσιες στα κύτταρα, τους εξωκυτταρικούς ιστούς και τα σωματικά υγρά.
Επομένως, η παρακολούθηση της οξείδωσης των πρωτεϊνών είναι κρίσιμη για την επιτυχή ανάπτυξη βιοφαρμακευτικών.
Το Yaohai Bio-Pharma προσφέρει υπηρεσία ανάλυσης αξονικής οξείδωσης, η οποία σας επιτρέπει να καθορίσετε την αξονική οξείδωση με Τεκμηριωτική Χρωματογράφηση Υγρών - Μαζική Σπεκτρομετρία (LC-MS).
Είμαστε ενεργοί στην Πρωτεινική Διαχαρακτηρισμό πολλών μεγάλων μορίων, συμπεριλαμβανομένων των Αναπαραγωγικών Υποενότητων Εμβολίων, Nanobodies/VHHs/Μονοδομενικών αντισώματα (sdAbs), Τμήματα Αντισώματος, Ορμονών/Πεπτιδίων, Cytokines, Γονιμοποιητικών Παραγόντων (GF), Ενζύμων, Κολλαγενίων, κλπ.
Κανονιστικές Απαιτήσεις για την Αλλοίωση Αμινοξέων
Σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ICH Q6B, οι οξειδωμένες μορφές μπορεί να ανιχνευθούν και χαρακτηριστούν με χρωματογραφικές, ηλεκτροφορητικές και/ή άλλες σχετικές αναλυτικές μέθοδοι (π.χ., Υψηλής Απόδοσης Υγρής Χρωματογραφίας (HPLC), καπιλλιακή ηλεκτροφόρηση, μαζική φασματοσκοπία, κυκλική διχροΐτητα).
Αναλυτικές Μεθόδοι
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Οξείδωση Αμινοξέων |
LC-MS, Υψηλής Απόδοσης Υγρής Χρωματογραφίας με Αντιστροφή Φάση (RP-HPLC) ή Υψηλής Απόδοσης Υγρής Χρωματογραφίας με Χρωματογραφία Ιδροφοβικής Αλληλεπίδρασης (HIC-HPLC) και μαζική φασματοσκοπία |
Αναλυτικές Διαδικασίες
1. Παρασκευή δείγματος
2. LC-MS
3. Ανάλυση δεδομένων
Οι καταπληκτικές (Trp) υποστροφές είναι ιδιαίτερα πρόχειρες στην οξείδωση λόγω της υψηλής αντιδραστικότητας του αρωματικού ινδόλου με ενεργά είδη του οξυγόνου. Η οξείδωση του Trp απαιτεί κάποια εκτέλεση των καταπληκτικών υποστροφών που είναι συνήθως κρυμένες στην τρισδιάστατη δομή του πρωτεΐνου.
Ωστόσο, όταν οι υποστροφές Trp οξειδώνονται, μπορούν να μετατρέπονται σε μια σειρά προϊόντων με πολύ διαφορετικές ιδιότητες από το αρχικό Trp. Ο πιο συνηθισμένος δρόμος για την οξείδωση του Trp περιλαμβάνει την δημιουργία του N-formylkynurenine (Διαφορά μάζας: +32).
Ένα άλλο συχνά οξειδωμένο αμινοξέ αντιγράφει είναι το μεθιονίνιο. Το άτομο θειού στην υποστροφή Met μπορεί να αποδέχεται είτε ένα είτε δύο άτομα οξυγόνου, προκαλώντας την δημιουργία sulfoxide (Διαφορά μάζας: +16) ή sulfone (Διαφορά μάζας: +32), αντίστοιχα. Αυτή η τροποποίηση είναι σχετικά συνηθισμένη λόγω της συνήθως υψηλής επιφανειακής εκτέλεσης του Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
