Optimalisering van die Ontsmettingsproses vir Herkombinerde Menslike Insulië

In die afgelope jare het die groei in diabetes-pasiënte die vraag na insuliëngedryf, maarordable insulien is kort van voorsko. Effektiewe, ekonomiese insuliënproduksie is krities. Dit word hoofsaaklik geproduseer deur Escherichia coli (E. coli) en gist weens vinnige groei en lae koste, maar E. coli het komplekse naverwerkingsprosesse.

Oorsig van Naverwerking:

Die verfyning van rekombinante menslike insuliëen uit E. coli inklusie-liggame behels verskeie stappe, insluitend herwinning, wasing, oplosbaarheid en oksidasie, afsnyding, bufferruiling, kromatografiese verfyning, neerslagvorming, renatuering, ensematische afsnyding en formulering.

Yaohai Bio-Pharma besit wydverspreide ervaring in rekombinante insuliënproduksie en -verfyning, saam met 'n span van deskundiges, wat verseker dat jou insuliënproduksie met hoë effektiwiteit voltooi word. Deur ons ervaring van honderde projekte te gebruik, samenvat Yaohai hoe om die Naverwerkingproses vir Rekombinante Menslike Insuliëen te optimaliseer.

Inklusiebodyherwinning en Wasvoorbereiding:

Selle word gestoor deur meganiese metodes (soos ultra-geluid, hoë-druk homogenisasie) of lysozymbehandeling, gevolg deur wasbuffer (wat urea, Triton X-100 ens. bevat) om verontreinigings te verwyder. Tydens die wasproses moet parameters geoptimeer word om proteïenkwessie te verseker terwyl koste onder beheer gehou word.

Inklusiebodyoplosbaarheid en Oksidasie:

Hoë-konseentrasie ontvou-stowwe (soos guanidine-hydrochloride en urea) word gebruik om inklusieberigte oplosbaar te maak, met dithiothreitol of β-merkaptietanol bygevoeg om die vorming van onjuiste disulfiedbindinge te voorkom. pH en temperatuur het 'n groot impak op die oplosbaarheids- en oksidasiereaksies.

Kliefsnede en Bufferruiting:

Cyaanogenbromide-uitsnyding word gebruik om die N-termyniese beginaminozuur te verwyder, maar dit stel giftigheids- en lae spesifisiteitoprobleme. Deur dialise, ultrafiltrasie of grootte-uitsondering kromatografie, verwyder bufferuitruiling skadelike reagensies in voorbereiding vir volgende bewerkings.

Kromatografiese Ontsmetting en Neerslagvorming:

Meerpleeglike kromatografietechnieke word gebruik om insuliene te ontsmet, insluitend affiniteitskromatografie, ionwisselaarkromatografie, omgekeerde-fasekromatografie, hidrofoobewerkingkromatografie en grootte-uitsondering kromatografie. Neerslagmetodes, soos pH-neerslag en sinterkristalvasie, word gebruik om vervuiling te verwyder en proteïne te koncentreer.

Renaturalisering:

Die oplosbare proteïen word verdun in 'n renaturaliseringsbuffer om die korrekte vorming van dissulfiedbindinge en proteïenvouing te bevorder. Proteïenvouing vloeikromatografie en dialise word ook as metodes vir renaturalisering gebruik.

Enzimatiese Uitsnyding en Formulerings:

Trypsin en carboxypeptidase B word gebruik om die C-peptiid te skei, wat die aktiewe insuliënheterodimer vorm. Ten slotte word kristallisering en lyofilisering gebruik om residuële sake en buffere te verwyder, waarna 'n stabiele formulering voorberei word. Spesifieke addities (soos sink en protamine) word bygevoeg om verskillende kliniese behoeftes te voldoen.

Gevolgtrekking:

Navorste van insulien afkomstig van E. coli is kompleks. Toekomstige fokus moet op die optimering van hierdie stappe wees vir doeltreffende, ekonomiese produksie om vraag te dek en koste te verminder.

Yaohai Bio-Pharma soek ook aktief globale instellings- of individuele partners en bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, aarzel asb nie om met ons in kontak te kom: [email protected]