Optimalisering van die suiweringsproses vir rekombinante menslike insulien

In onlangse jare het die groei van pasiënte met diabetes insulienvraag gedryf, maar bekostigbare insulien is 'n tekort. Doeltreffende, ekonomiese insulienproduksie is van kardinale belang. Hoofsaaklik geproduseer via Escherichia coli (E. coli) en gis as gevolg van vinnige groei en lae koste, E. coli staar komplekse stroomaf verwerking in die gesig.

Oorsig van stroomaf verwerking:

Die suiwering van rekombinante menslike insulien van E. coli-insluitingsliggame behels veelvuldige stappe, insluitend herstel, was, solubilisering en oksidasie, splitsing, bufferuitruiling, chromatografiese suiwering, presipitasie, hernaturering, ensiematiese splitsing en formulering.

Yaohai Bio-Pharma spog met uitgebreide ervaring in rekombinante insulienproduksie en suiwering, tesame met 'n span kundiges, wat verseker dat jou insulienproduksie met hoë doeltreffendheid voltooi word. Met behulp van ons ervaring van honderde projekte, som Yaohai vriendelik op hoe om die stroomaf-suiweringsproses vir rekombinante menslike insulien te optimaliseer.

Insluiting Liggaamsherstel en was:

Selle word ontwrig met behulp van meganiese metodes (soos ultrasonisering, hoëdruk-homogenisering) of lisosiembehandeling, gevolg deur wasbuffers (wat ureum bevat, Triton X-100, ens.) om onsuiwerhede te verwyder. Tydens was moet parameters geoptimaliseer word om proteïenkwaliteit te verseker terwyl koste beheer word.

Insluiting Liggaamsolubilisering en oksidasie:

Hoëkonsentrasie denaturante (soos guanidienhidrochloried en ureum) word gebruik om insluitingsliggame op te los, met dithiotreitol of β-merkaptoetanol bygevoeg om die vorming van verkeerde disulfiedbindings te voorkom. pH en temperatuur het 'n beduidende impak op die oplos- en oksidasiereaksies.

Splitsing en bufferuitruiling:

Sianogeenbromiedsplyting word gebruik om die N-terminale aanvangsaminosuur te verwyder, maar dit hou toksisiteit en lae spesifisiteitskwessies in. Deur dialise, ultrafiltrasie of grootte-uitsluitingchromatografie, verwyder Buffer-uitruiling skadelike reagense ter voorbereiding vir daaropvolgende operasies.

Chromatografiese suiwering en neerslag:

Veelvuldige chromatografiese tegnieke word gebruik om insulien te suiwer, insluitend affiniteitschromatografie, ioonuitruilchromatografie, omgekeerde-fase chromatografie, hidrofobiese interaksie chromatografie en grootte uitsluiting chromatografie. Presipitasiemetodes, soos pH-presipitasie en sinkkristallisasie, word gebruik om onsuiwerhede te verwyder en proteïene te konsentreer.

Hernaturering:

Die oplosbare proteïen word verdun in 'n renatureringsbuffer om die korrekte vorming van disulfiedbindings en proteïenvouing te bevorder. Proteïenvou-vloeistofchromatografie en dialise is ook metodes wat vir hernaturering gebruik word.

Ensiematiese splitsing en formulering:

Tripsien en karboksipeptidase B word gebruik om die C-peptied te splits, wat die aktiewe insulienheterodimeer vorm. Ten slotte word kristallisasie en vriesdroging gebruik om oorblywende soute en buffers te verwyder, wat 'n stabiele formulering voorberei. Spesifieke bymiddels (soos sink en protamien) word bygevoeg om aan verskillende kliniese behoeftes te voldoen.

Gevolgtrekking:

Stroomaf verwerking van insulien van E. coli kompleks is. Toekomstige fokus moet wees op die optimalisering van hierdie stappe vir doeltreffende, ekonomiese produksie om in die vraag te voorsien en koste te verminder.

Yaohai Bio-Pharma is ook aktief op soek na institusionele of individuele globale vennote en bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, voel asseblief vry om ons te kontak: [email protected]