Vervaardigingsproses van eGFP mRNA

Die produksie van eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA behels 'n reeks molekulêre biologie tegnieke om 'n funksionele RNA-molekule te genereer wat kodeer vir die uitdrukking van die eGFP. Op die gebied van eGFP mRNA, het Yaohai Bio-Pharma uitgebreide ondervinding opgedoen om aan die spesifieke behoeftes van kliënte te voldoen. Met behulp van ons ervaring het ons die prosesvloei vir die vervaardiging van EGFP-mRNA gesintetiseer.

1. Kloning van die eGFP-geen: Dit om die geenvolgorde wat vir eGFP kodeer te verkry. Hierdie geen word tipies vanaf 'n voorafbestaande plasmiedvektor gekloon of kunsmatig gesintetiseer op grond van die bekende nukleotiedvolgorde. Die gekloonde geen word dan deur volgordebepaling geverifieer om akkuraatheid te verseker.
2. Gene optimering vir uitdrukking: Vir optimale uitdrukking in die teikenstelsel (bv. soogdierselle, bakterieë of in vitro transkripsiestelsels), kan die eGFP-geen kodonoptimering ondergaan. Dit behels die vervanging van skaars kodons in die oorspronklike volgorde met meer gereeld gebruikte kodons in die gasheerorganisme, wat die kanse op doeltreffende vertaling verhoog.
3. In vitro Transkripsie Sjabloon Voorbereiding: Sodra die geoptimaliseerde geen gereed is, word dit geïnkorporeer in 'n geskikte vektor, dikwels 'n plasmied, wat regulatoriese elemente bevat wat nodig is vir transkripsie (bv. 'n promotorvolgorde). Hierdie plasmied dien as 'n templaat vir in vitro transkripsie.
4. In vitro transkripsie: Met behulp van die voorbereide plasmied sjabloon, word in vitro transkripsie uitgevoer om eGFP mRNA te sintetiseer. Hierdie proses behels die gebruik van RNA-polimerase-ensieme, wat die promotorvolgorde herken en transkripsie inisieer, wat 'n komplementêre RNA-string tot die DNA-sjabloon produseer. Afhangende van die verlangde toepassing, kan die mRNA gekap, polyadenylated, en/of gewysig word om stabiliteit en translasie doeltreffendheid te verbeter.
5. Suiwering en kwaliteitbeheer: Die gesintetiseerde eGFP-mRNA word dan gesuiwer om enige kontaminante, insluitend DNA, proteïene en vrye nukleotiede, te verwyder. Suiweringsmetodes kan gelelektroforese, kolomchromatografie of kraalgebaseerde skeiding insluit. Na suiwering word die mRNA ontleed vir kwaliteit, insluitend konsentrasie, suiwerheid en integriteit, met behulp van tegnieke soos UV-Vis spektrofotometrie en gelelektroforese.
6. Berging en aflewering: Die gesuiwerde eGFP mRNA word tipies by lae temperature gestoor om stabiliteit te handhaaf. Vir eksperimentele gebruik kan die mRNA in selle afgelewer word met behulp van verskeie metodes, insluitend elektroporasie, lipofeksie of virale vektore, afhangende van die spesifieke toepassing en teikenseltipe.
7. Uitdrukking en verifikasie: Sodra dit binne die sel is, word die eGFP mRNA vertaal in die verbeterde groen fluoresserende proteïen, wat met fluoressensiemikroskopie gevisualiseer kan word. Dit maak voorsiening vir die verifikasie van suksesvolle mRNA-produksie, aflewering en uitdrukking.

Samevattend behels die produksie van eGFP mRNA die kloon van die geen, die optimalisering daarvan vir uitdrukking, die voorbereiding van 'n in vitro transkripsie sjabloon, die uitvoering van die transkripsie reaksie, die suiwering van die resulterende mRNA, en uiteindelik die lewering daarvan in selle vir uitdrukking en verifikasie.

Ons is ook aktief op soek na institusionele of individuele globale vennote. Ons bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, voel asseblief vry om ons te kontak: [email protected]