Vervaardigingsproses van eGFP mRNA

Die produksie van eGFP (Versterkte Groen Fluoresente Proteïen) mRNA behels 'n reeks molekulêre biologie tegnieke om 'n funksionele RNA-molekuul te genereer wat kodereer vir die uitdrukking van eGFP. In die gebied van eGFP mRNA het Yaohai Bio-Pharma wydverspreide ervaring opgedoen in die voldoening aan die spesifieke behoeftes van kliënte. Deur ons ervaring te gebruik, het ons die prosesstroom vir die produksie van EGFP mRNA gesintetiseer.

1. Kloning van die eGFP Gen : Dit om die gensekwensie te verkry wat kodereer vir eGFP. Hierdie gen word gewoonlik gekloneer van 'n bestaande plasmidvector of sinteties gemaak gebaseer op die bekende nukleotiedsekwensie. Die gekloneerde gen word dan deur middel van sekwering bevestig om akkuraatheid te verseker.
2. Gen Optimalisering vir Uitdrukking : Vir optimale uitdrukking in die doelstelsel (bv. sogtiere selles, bakterieë of in vitro transkripsiestelsels), kan die eGFP-gen onderworpe word aan kodonoptimering. Dit behels die vervanging van seldsame kodone in die oorspronklike volgorde met meer algemeen gebruikte kodone in die gasorganisme, wat die kans op doeltreffende vertaling verhoog.
3. In vitro Transkripsiepatroonvoorbereiding : Sodra die geoptimeerde gen gereed is, word dit ingekorporeer in 'n geskikte vektor, gewoonlik 'n plasmid, wat regulatoriese elemente bevat wat nodig is vir transkripsie (bv. 'n promotorvolgorde). Hierdie plasmid dien as patroon vir in vitro transkripsie.
4. In vitro Transkripsie : Deur die voorbereide plasmidtemplate te gebruik, word in vitro transkripsie uitgevoer om eGFP mRNA te sintetiseer. Hierdie proses behels die gebruik van RNA polymerase-ensimme, wat die promotorvolgorde herken en transkripsie begin, 'n komplementêre RNA-vlak tot die DNA-template produseer. Afhanklik van die gewenste toepassing, kan die mRNA bekroon, poliadényleer en/of gemodifiseer word om stabiliteit en vertalingsdoeltreffendheid te verbeter.
5. Opskoning en Kwaliteitbeheer : Die gesintetiseerde eGFP mRNA word dan opgeskoon om enige verontreinigers, insluitend DNA, proteïene en vrye nukleotiede, te verwyder. Opskooningsmetodes kan gelfelektroforesis, kolomkromatografie of deeltjiegebasseerde skeiding insluit. Nadat purifikasie voltooi is, word die mRNA geanaliseer vir kwaliteit, insluitend konentrasie, pureheid en integriteit, deur tegnieke soos UV-Vis spektrofotometrie en gelfelektroforesis te gebruik.
6. Opslag en Levering : Die gezuiverde eGFP mRNA word gewoonlik by lae temperature opgeslaan om stabiliteit te handhaaf. Vir eksperimentele gebruik kan die mRNA in selles afgelewer word deur verskeie metodes, insluitend elektroporasie, lipofeksie of virale vektore, afhanklik van die spesifieke toepassing en doelwit-seltipe.
7. Uitdrukking en Verifikasie : Eenmal binne die selle, word die eGFP mRNA omgeskakel in die versterkte groen fluoreserende eiwit, wat deur middel van fluoreserende mikroskoopie besigtig kan word. Dit maak dit moontlik om suksesvolle mRNA-produksie, aflewering en uitdrukking te verifieer.

In 'n oorsig beteken die produksie van eGFP mRNA om die gen te kloon, dit te optimeer vir uitdrukking, 'n in vitro transkripsie-sjabloon voor te berei, die transkripsiereaksie uit te voer, die resulterende mRNA te zuiver, en uiteindelik dit in selles af te lewer vir uitdrukking en verifikasie.

Ons soek ook aktief instansiële of individuele wêreldwye partners. Ons bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As u enige vrae het, aarzel asb nie om ons te kontak nie: [email protected]