Kampioene van Reporter RNA-wysigingsmetodes

Wanneer jy kies watter metode van verslaggever mRNA-wysigings preferabel is, is daar geen definiete antwoord nie aangesien elke metode en verslaggevergenetiese sy eie voordele en toepaslike scenario's het. Hier is 'n paar algemene mRNA-wysigingsmetodes en verslaggevergene, saam met hul kenmerke en geskiktheid.

mRNA Wysigingsmetodes

Metilering:

1. m6A : Verbind met mRNA-stabiliteit, splicing, vertaling en miRNA-verwerking. Opsporingsuitdagings sluit in keuse van antilichame en lokalisering.
2. 5' Kap Nm : Verbeter stabiliteit, splicing, poliadenylasie en kern-eksport. Help onderskeidelik self-RNA van vreemde RNA.
3. Pseudouridyliering : Verander kodone, verbeter stabiliteit en reageer op stres. Geëntseel deur pseudouridine-sintases.

Invoering van Nie-Natuurlike Nukleotide:

1. Gedurende transkripsie ingevoer met 'n dubbele chemiese modifikasie-strategie. Dit verbeter stabiliteit, doeltreffendheid en proteïen-uitdruking.

Rapporteur Gene

1. Groen Fluoresente Proteïen Gen (GFP) : Voordele: Maklik te detecteer, stabiele fluoresensie-eienskappe, nie toxis vir selle nie, geskik vir lewensel-imaging. Nadele: Beperkte fluoresensie-intensiteit.
2. Verbeterde Groen Fluoresente Proteïen (eGFP) : Voordele: Oor 6 keer helderder as wilde-tipe GFP, wat dit meer geskik maak as 'n rapporteur-gen vir die studie van gen-uitdruking, regulering, sel-differensiasie en proteïen-lokalisering en -transport binne organisme.
3. Rooi Fluoresente Proteïene (bv. mCherry) : Voordele: Langer opwek-en emissielengtes, wat in 'n lager agtergrond tydens intrasellulêre imaging lei, uitstekende fluoresensie-helderheid en fotostabiliteit, en lager sellulêre toksisiteit. Nadele: Moet moontlik nie so algemeen gebruik word as GFP onder sekere eksperimentele toestande nie.
4. Vuurkaggel-Luciferase : Voordelig: In die teenwoordigheid van ATP, magnesiumione en suurstof, kan dit die oksidasie van luciferien na oksiluciferien kataliseer, waartydens bioluminesensie uitgestoot word. Dit is geskik vir gebruik as 'n kontrole om die vertalingsdoeltreffendheid van teikenogene in sakkiediere-selle, sellewendigheid en in vivo beeldvormingstoetsinge te bestudeer.

Gevolgtrekking

Wanneer daar gekies word tussen verskillende metodes van verslaggewende mRNA-wyzigings, hang dit af van spesifieke eksperimentele doelwitte, navorsingsagtergronde en eksperimentele toestande. Byvoorbeeld, as hoë sensitiwiteit vereis word, kan eGFP 'n beter keuse wees. As beeldvorming by langer golflengtes nodig is om agtergrondinterferensie te verminder, kan rooi fluoreserende proteïene soos mCherry meer geskik wees. Daarby kan, gebaseer op die spesifieke wysigingsbehoeftes van mRNA (bv. verhoogde stabiliteit, verbeterde vertalingsdoeltreffendheid), die toepaslike wysigingsmetode gekies word.

As die eerste en grootste mikrobiële biologiese CRDMO in Groot-China bied Yaohai Bio-Pharma einde-teen-einde maatgesnede oplossings of afsonderlike dienste aan, wat strek van RNA-sintese, stamingenieurswese en -bou, bo- en onderstroomprosesontwikkeling, tot GMP-of nie-GMP-nivo farmasieutiese stowwe vervaardiging, en vul-en-afsluitdienste vir verskeie modaliteite, soos mRNA, circRNA, plasmid RNA, rekombinante proteïene, peptiede, ensime, enkele domeinantistofte en VLP's vir menslike en veterinaire gebruik.

Yaohai Bio-Pharma soek ook aktief globale instellings- of individuele partners en bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, aarzel asb nie om met ons in kontak te kom: [email protected]