tính toàn vẹn của mRNA
Ý nghĩa của phân tích tính toàn vẹn của mRNA
mRNA được công nhận là có tính không ổn định vốn có và dễ bị phân mảnh khi có các yếu tố bên ngoài, đặc biệt là trong quá trình sao chép in vitro (IVT) và quá trình tinh chế, trong đó các hạt nhân phổ biến đặt ra thách thức. Đánh giá tính toàn vẹn của mRNA là rất quan trọng trong quá trình phát triển tiếp theo của các loại thuốc dựa trên mRNA, đảm bảo cả tính an toàn và tính sẵn có của sản phẩm.
Yaohai-BioPharma cung cấp các dịch vụ kiểm tra tính toàn vẹn của mRNA toàn diện, sử dụng các phương pháp như điện di trên gel agarose (AGE), điện di mao quản (CEG) và sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), tuân thủ các tiêu chuẩn chất lượng nghiêm ngặt cho cả nghiên cứu và thử nghiệm lâm sàng.
Yêu cầu pháp lý về tính toàn vẹn của mRNA
Theo những cân nhắc về quy định của WHO, “tính toàn vẹn của cấu trúc của mRNA được coi là thuộc tính chất lượng quan trọng đối với việc giải phóng mRNA. Do đó, cần có sự kiểm soát đối với tính toàn vẹn của mRNA, tỷ lệ phần trăm mRNA nguyên vẹn, tỷ lệ phần trăm các đoạn mRNA, v.v.”
Phương pháp phân tích
nghiên cứu |
Phương pháp |
tính toàn vẹn của mRNA |
AGE, Agarosegđiện di el |
CGE,Điện di mao quản |
CGE-LIF, Điện di trên gel mao quản với phát hiện huỳnh quang cảm ứng ánh sáng |
Tính toàn vẹn của mRNA bằng điện di trên gel Agarose
Điện di trên gel agarose là một kỹ thuật được sử dụng rộng rãi để đánh giá tính toàn vẹn của tổng số RNA. Điều này liên quan đến việc chạy mẫu RNA trên gel agarose biến tính, được nhuộm bằng ethidium bromide hoặc SYBR Green. Gel biến tính, bao gồm agarose, tạo điều kiện thuận lợi cho việc tách RNA dựa trên kích thước khi có dòng điện chạy vào. Khi RNA tích điện âm di chuyển về phía đầu dương của gel, các mảnh nhỏ hơn sẽ di chuyển nhanh hơn, dẫn đến sự phân loại các phân tử RNA dựa trên kích thước.
Tính toàn vẹn của mRNA bằng điện di gel mao mạch
Điện di trên gel mao mạch (CGE) là phương pháp phân tích có độ phân giải cao, then chốt để đánh giá tính toàn vẹn của các phân tử RNA theo chiều dài. Đánh giá này có ý nghĩa quan trọng trong việc đảm bảo chất lượng, hiểu biết về hiệu lực và tối ưu hóa quy trình sản xuất. Tương tự như điện di trên gel agarose, CGE sử dụng dòng điện để phân tách các đoạn RNA dựa trên điện tích và kích thước của chúng. Trong CGE, mao quản chứa đầy chất nền gel tách được pha thuốc nhuộm huỳnh quang. Sự chuyển động của RNA dọc theo mao quản phụ thuộc vào kích thước của nó và việc phát hiện được thực hiện bằng cách sử dụng máy dò tia cực tím (UV) hoặc huỳnh quang cảm ứng ánh sáng (LIF).
EN
