Xác định thành phần và số lượng lipid LNP
Ý nghĩa của việc phân tích thành phần lipid LNP
Các hạt nano lipid (LNP), bao gồm lipid cation, cholesterol, phospholipid và lipid liên hợp PEG, đóng vai trò là hệ thống phân phối nổi bật cho các sản phẩm thuốc mRNA. Độ ổn định và tính lỏng hai lớp của LNP phụ thuộc vào tính chất và hàm lượng của các loại lipid khác nhau được sử dụng trong hệ thống công thức. Thành phần của lipid rất quan trọng đối với việc LNP vận chuyển thuốc tốt như thế nào.
Yaohai-BioPharma cung cấp giải pháp xác định và định lượng thành phần lipid mRNA-LNP bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với phương pháp phát hiện khí dung tích điện (HPLC-CAD).
Yêu cầu quy định đối với thành phần lipid
Theo những cân nhắc về mặt quy định của WHO, “Thành phần cuối cùng của vắc xin, bao gồm cả lipid, phải được mô tả cùng với số lượng các thành phần trong mỗi lần trình bày”.
Phương pháp phân tích
nghiên cứu | Phương pháp |
Thành phần lipid | HPLC kết hợp với Máy dò khí dung tích điện Corona (CAD) |
Thủ tục
Bước 1. Chuẩn bị mẫu lipid
Việc lựa chọn chất pha loãng là hết sức quan trọng để phân tích các thành phần lipid trong các sản phẩm thuốc mRNA-LNP. Chất pha loãng sẽ hòa tan hiệu quả từng thành phần lipid và phá vỡ mọi tương tác giữa lipid và mRNA được bao bọc. Các chất pha loãng tiềm năng bao gồm etanol, etanol/dimethyl sulfoxide (DMSO), etanol/formamit, etanol/triethylamine axetat và các chất khác.
Bước 2. HPLC-CAD
Sắc ký lỏng pha đảo (RP-HPLC) kết hợp với máy dò khí dung tích điện (CAD) đã được tích hợp vào thử nghiệm thành phần lipid LNP. Do lipid thiếu các chất mang màu và không hấp thụ bức xạ tia cực tím (UV) mà không tạo dẫn xuất nên quá trình bay hơi thường là một thách thức. CAD, nhạy hơn, có thể phân biệt được hàm lượng lipid ở phạm vi rộng hơn. Trước đây, phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cực cao (UHPLC) kết hợp với phương pháp máy dò khí dung tích điện (CAD) đã được xây dựng và áp dụng trong phân tích lipid cho các nghiên cứu LNP RNA can thiệp nhỏ (siRNA).
Bước 3. Phân tích dữ liệu
Số lượng của từng lipid trong mẫu bao gồm các phép tính dựa trên đường cong chuẩn nhân với hệ số pha loãng. Quá trình này mang lại hàm lượng lipid cho từng thành phần trong mẫu mRNA-LNP.
Trường hợp phân tích thành phần lipid LNP bằng HPLC-CAD
Dựa trên HPLC-CAD, Yaohai-BioPharma đã phát triển một phương pháp mạnh mẽ để phân tích các thành phần lipid của mRNA-LNP. Phương pháp này đã được xác nhận là tuyến tính, có thể lặp lại, đúng, chính xác và đặc hiệu cho các công thức LNP, có thể hỗ trợ phát triển quy trình, phát triển công thức, kiểm tra độ ổn định và giải phóng mRNA-LNP.
Sắc ký đồ của 4 lipid bằng phương pháp HPLC-CAD của Yaohai-BioPharma
Độ tuyến tính của phương pháp HPLC-CAD của Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
EN
