Розкриття таємниць високоякісного витягування плазмід

Виділення плазмідів є ключовим для дослідників. Як вектори генів, плазміди є важливими у дослідженні вакцин та геноїтерапії, де якість має велике значення. Ключовими факторами якості є пропорція суперзакрученого ДНК та вміст ендотоксинів. Норми варіюються: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, з <5% лінійного/відкрито-циркулярного ДНК. Клієнти часто переважають ≥95% суперзакрученого. Рівні ендотоксинів такі: для досліджень (>50 EU/µg), трансфекція (<50 EU/µg) та без ендотоксинів (<0.1 EU/µg).

Суперзакручене плазмідне ДНК

Плазміди з Escherichia coli включають суперзакручену (SC), відкрито-циркулярну (OC) та лінійну (L) ДНК. Висока пропорція SC підвищує ефективність трансфекції та виразність. Наприклад, трансфекція плазміду з 85.45% SC вища на 2.5 рази, а виразність HGF плазміду з 93.28% SC вища на 1.8 рази, що підтверджує перевагу SC ДНК.

Відкрито-циркулярна ДНК: Коли один із шлунків подвійноспіральної ДНК переривається, суперзакручену структуру розтягує, утворюючи відкрито-циркулярний плазмід більшого об'єму, який мігрує найповільніше під час електрофорезу і знаходиться наверху.

Лінійна ДНК: Коли обидва шлунки плазмідної ДНК перериваються, утворюється лінійна структура з відносно меншим об'ємом, яка мігрує швидше за відкрито-циркулярну ДНК, але повільніше за суперзакручену ДНК, що займає друге місце.

Суперзакручена ДНК: Дві спіралі переплітаються, закручуваячись у суперзакручену структуру на основі спіралі ДНК. Вона має найменший об'єм і мігрує найшвидше під час електрофорезу, знаходиться унизу.

Кvantitatивний аналіз пропорції суперзакручення

Лабораторії використовують агаровий гель електрофорез (AGE) та Gel-Pro Analyzer для оцінки пропорції суперзакручення за допомогою зображень електрофорезу. Одне зображення показує 97,539% СДНК, тоді як інше показує 63,833% СДНК та 36,167% ОДНК (лінійна ДНК не видима).

Таємниця ендотоксинів у плазмідах

Ендотоксин є компонентом зовнішнього шару клітинної стіни грамвід'ємних бактерій, що вивільняється після смерті або лізису бактерій, і містить токсичну ліпополісахаридну частинку A. Під час екстракції плазмід ендотоксин потрапляє до розчинника лізису, що впливає на ефективність трансфекції та викликає непевні імунні відгуки, що призводить до хибних позитивних результатів у дослідженнях.

Кількісний та якісний аналіз ендотоксину

Тест Лімулусової амебоцитної лізи (LAL) виявляє ендотоксин через аглютинацію з 2-кето-3-деоксиоктоновою кислотою (KDO) у ліпополісахариді (LPS). Він є якісним та напівкількісним, що вказує на присутність ендотоксину за допомогою згортання або зміни кольору при змішуванні з вибірками.

Yaohai Bio-Pharma пропонує плазміди у надспіральному стані без ендотоксину. Завдання робіт на Yaohai покращує ефективність трансфекції та експресії. Доставлені плазміди мають ≥95% спіральний стан (сер. 85%±10%) та рівень ендотоксину ≤0.1, ≤0.01 або ≤0.005 EU/μg.

Ми також активно шукаємо глобальних партнерів серед установ або окремих осіб. Ми пропонуємо найбільш конкурентоспроможну компенсацію в галузі. Якщо в вас є будь-які питання, будь ласка, не соромтеся звертатися до нас: [email protected]