Виробництво рекомбінантного білка: сконструйовані штами E. coli

Escherichia coli (E. coli) зіграла значну роль у виробництві рекомбінантних білків у біофармацевтичній промисловості, слугуючи першим вектором експресії для виробництва біологічних ліків. Серед інших переваг кишкова паличка може похвалитися швидким ростом, зручною генетичною маніпуляцією та швидким синтезом рекомбінантних білків. Великі модифікації зробили E. coli оптимальним вибором для експресії білка, що призвело до розробки різних сконструйованих штамів E. coli.

Yaohai Bio-Pharma спеціалізується на наданні комплексних послуг аутсорсингу для ферментації, очищення, розробки процесу розробки та виробництва серії біофармацевтичних препаратів з використанням систем експресії E. coli. Що стосується великого досвіду Yaohai, ми резюмували, що чотири поширені штами E. coli використовуються для виробництва рекомбінантного білка та їхні особливості.

Штам BL 21

Штам BL21, отриманий з лінії E. coli B, не містить протеази Lon і протеази зовнішньої мембрани OmpT. Lon-протеаза в основному руйнує екзогенні білки, тоді як OmpT руйнує в основному білки позаклітинного матриксу. Відсутність цих двох ключових протеаз може ефективно запобігати деградації рекомбінантних білків.

Штам орігамі

Штам Origami, похідний E. coli K-12, має мутації в тіоредоксинредуктазі та глутатіонредуктазі, які сприяють утворенню правильно згорнутих білків, що містять дисульфідні зв’язки, і підвищують розчинність білка. Штам Origami, включаючи Origami, Origami 2 і Origami B, підходить для експресії активних білків, що містять дисульфідні зв'язки.

Shuffle штам

Штам SHuffle конститутивно експресує ізомеразу дисульфідних зв’язків DsbC у цитоплазмі, сприяючи утворенню правильних дисульфідних зв’язків в окислених білках. Він також служить молекулярним шапероном для згортання білка, допомагаючи у формуванні правильної конформації.

Штам Rosetta

Штам Rosetta доповнює E. coli тРНК, що відповідають рідкісним кодонам, з метою покращення рівня експресії екзогенних генів, особливо еукаріотичних генів, у прокаріотичних системах. Отриманий з BL21 і містить стійку до хлорамфеніколу плазміду pRARE, він доповнює шість тРНК, що відповідають рідкісним кодонам (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC і GGA), які спочатку були відсутні в E. coli, забезпечуючи більш «універсальну» експресію білка.

Висновок

Трьома основними факторами успішного виробництва рекомбінантних білків є господар, вектор і умови культивування. Грунтуючись на розумінні фізико-хімічних властивостей рекомбінантного білка, унікальних переваг кожного штаму та конкретних потреб експерименту, слід вибрати найбільш підходящого господаря. Крім того, такі фактори, як плазмідні вектори, температура та індуктори, повинні бути оптимізовані для посилення експресії білка.

Yaohai Bio-Pharma також активно шукає інституційних або індивідуальних глобальних партнерів і пропонує найконкурентнішу компенсацію в галузі. Якщо у вас виникли запитання, зв’яжіться з нами: [email protected]