Виробництво рекомбінантних протеїнів: Інженеровані штамни E. coli

Escherichia coli (E. coli) відіграє значну роль у виробництві рекомбінантних білків у біофармацевтичній промисловості, ставши першим виразним вектором для виготовлення біологічного ліку. E. coli має переваги швидкого росту, зручної генетичної модифікації та швидкого синтезу рекомбінантних білків. Розширений модифікації зробили E. coli оптимальним вибором для вираження білків, що призвело до створення різних інженерних штамів E. coli.

Yaohai Bio-Pharma спеціалізується на наданні повних послуг аутсорсингу для ферментації, очищення, розробки формуляції процесу та виробництва серії біофармацевтичних продуктів за допомогою систем вираження E. coli. Ураховуючи великий досвід Yaohai, ми підсумували, що чотири поширені штами E. coli використовуються для виробництва рекомбінантних білків та їх характеристики.

Штам BL 21

Потрібний від штаму E. coli B лінії, штам BL21 не має протеази Lon та зовнішньошарової мембрани протеази OmpT. Протеаза Lon головним чином розкладає екзогенні білки, тоді як OmpT головним чином розкладає білки екстрацелюлярної матриксу. Відсутність цих двох ключових протеаз може ефективно запобігти розкладу рекомбінаційних білків.

Штам Origami

Штам Origami, похідний від E. coli K-12, має мутації в тіоредоксин-редуктазі та глутатон-редуктазі, що сприяють утворенню правильно згинених білків, що містять дисульфідні зв'язки, і покращують розчинність білків. Штами Origami, включаючи Origami, Origami 2 та Origami B, підходять для вираження активних білків, що містять дисульфідні зв'язки.

Штам SHuffle

Штам SHuffle конститутивно виражає изомераз двосульфідних зв'язків DsbC у цитоплазмі, сприяючи утворенню правильних двосульфідних зв'язків у окислених белках. Вона також виступає як молекулярний хаперон для складання белків, допомагаючи утворенню правильної конформації.

Штам Rosetta

Штам Rosetta доповнює E. coli тРНК, що відповідає рідким кодонам, метою є підвищення рівня експресії екзогенних генів, особливо еукаріотичних генів, у прокаріотичних системах. Постачається від штаму BL21 і несе плазмід pRARE, що має хлорамфеніkol-резистентність, він доповнює шість тРНК, що відповідають рідким кодонам (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, і GGA), яких початково не було у E. coli, забезпечуючи більш "універсальне" вираження белків.

Висновок

Три головні фактори для успішного виробництва рекомбінальних білків — це хост, вектор та умови культивування. На основі розуміння фізико-хімічних властивостей рекомбінального білка, унікальних переваг кожного штаму та конкретних потреб експерименту необхідно вибрати найбільш підходящий хост. Крім того, необхідно оптимізувати такі фактори, як плазмідні вектори, температура та індуктори для покращення експресії білка.

Yaohai Bio-Pharma також активно шукає глобальних партнерів — інституцій або осіб — і пропонує найбільш конкурентоспроможну компенсацію в галузі. Якщо у вас є будь-які питання, будь ласка, не соромтеся звертатися до нас: [email protected]